臺灣博碩士論文加值系統

牛樟芝（Antrodia cinnamomea）為台灣特有種藥用真菌，寄生於牛樟樹中空的內壁上，其子實體常應用於各種疾病的治療，例如抗腫瘤、保肝、增強免疫力等常見疾病。近年來為了找尋牛樟芝作為藥材而非法盜砍牛樟樹的事件，使得牛樟樹越來越稀少。本研究將以段木栽培的方式培養牛樟芝，尋找可替代牛樟木的樹種（牛樟木、香樟、大葉樟、紅檜、越南檜木、美國檜木、香杉、日本杉、亞杉、桃花心木、柳桉木），探討段木栽培牛樟芝子實體及不同生長年份的牛樟芝子實體（菌膜、薄片、薄片肉菇、厚片肉菇、站菇、薄白樟、厚白樟）其成分分析及成分變化，並以體外細胞實驗測試其對三株腫瘤細胞（A-549 cells、HeLa cells、Hep 3B cells）的細胞毒殺能力。
研究結果顯示在三萜類化合物（antcin A、antcin B、antcin C、antcin H、antcin K）中，以薄片肉菇在antcin C、antcin H、antcin K的含量最高。在抑制腫瘤細胞方面（1 g/100 mL75%EtOH），萃取液處理24、48小時發現，日本杉段木栽培之牛樟芝對A549 cells處理24小時的抑制效果最好，IC50為74.6±2.5 ppm；處理48小時厚白樟的抑制效果最好，IC50小於50 ppm。處理24小時厚片肉菇對HeLa cells的抑制效果最好，IC50為70.5±6.9 ppm；處理48小時日本杉段木栽培之牛樟芝對HeLa cells的抑制效果最好，IC50為112.4±11.6 ppm。厚白樟對Hep 3B cells的抑制效果最好，IC50為74.5±3.6 ppm、小於50 ppm。
實驗結果得知，不同年份的牛樟芝子實體及段木栽培之牛樟芝（牛樟、香樟、日本杉）對腫瘤細胞有不同的抑制效果，未來將進行有效成份分離與純化的研究，以期能找出新的具抗癌活性的化合物。

摘 要........................................................I
Abstract....................................................II
目次........................................................IV
圖目錄.....................................................VIII
表目錄......................................................XIV
第一章 緒論....................................................1
1.1 前言......................................................1
第二章 文獻回顧................................................2
2.1 牛樟芝簡介.................................................2
2.1.1 牛樟芝介紹...............................................2
2.1.2 牛樟芝的命名.............................................3
2.1.3 牛樟樹...................................................4
2.1.4 牛樟芝型態特徵............................................4
2.1.5 寄生.....................................................5
2.2 牛樟芝主要成分分析...........................................6
2.2.1 一次代謝物................................................6
2.2.2 多醣.....................................................6
2.2.3 二次代謝物................................................6
2.3 牛樟芝的生理活性.............................................7
2.3.1 保肝作用..................................................7
2.3.2 毒殺癌細胞能力.............................................8
2.3.3 增進免疫能力...............................................8
2.3.4 抗氧化功效.................................................9
2.3.5 抗病毒功能.................................................9
2.3.6 抗發炎反應.................................................10
2.4 三萜類之簡介.................................................12
2.4.1 萜類之介紹.................................................12
2.4.2 牛樟芝三萜類之研究..........................................13
第三章 實驗動機與目的.............................................20
3.1 實驗目的.....................................................20
3.2 實驗架構.....................................................21
第四章 材料與方法.................................................22
4.1 實驗材料.....................................................22
4.1.1 牛樟芝樣品.................................................22
4.1.2 段木......................................................23
4.1.3 細胞株.....................................................23
4.1.4 細胞培養基.................................................24
4.1.5 實驗儀器設備...............................................24
4.1.6 實驗藥品...................................................25
4.2 實驗方法.....................................................27
4.2.1 樟芝液態發酵培養............................................27
4.2.2 段木處理...................................................27
4.2.3不同生長年份牛樟芝樣品前處理..................................27
4.2.4 段木栽培之牛樟芝樣品前處理...................................27
4.2.5 高效液相層析分析方法........................................28
（High Pressure Liquid Chromatography, HPLC）..............28
4.2.5.1 HPLC原理................................................28
4.2.5.2 HPLC全成份分析...........................................28
4.2.5.3 HPLC特定成份分析.........................................29
4.2.6 細胞培養...................................................30
4.2.6.1 細胞培養條件.............................................30
4.2.6.2 細胞繼代培養.............................................30
4.2.7 腫瘤細胞毒殺試驗............................................30
4.2.7.1 腫瘤細胞毒殺試驗之樣品處理.................................30
4.2.7.2 MTT Assay原理...........................................30
4.2.7.3 MTT Assay操作步驟........................................31
4.2.8 統計分析...................................................32
第五章 結果與討論.................................................33
5.1 牛樟芝段木栽培................................................33
5.2 不同年份牛樟芝子實體與段木栽培之牛樟芝子實體乙醇萃取液全成份分析....44
5.2.1 不同年份紅、白牛樟芝子實體乙醇萃取液含量變化....................44
5.2.2 段木栽培之牛樟芝子實體乙醇萃取液含量變化.......................45
5.3 不同年份牛樟芝子實體與段木栽培之牛樟芝子實體乙醇萃取液特定成份分....49
5.3.1 不同年份紅樟芝子實體乙醇萃取液含量變化.........................49
5.3.2 不同年份白樟芝子實體乙醇萃取液含量變化.........................49
5.3.3 不同年份紅、白牛樟芝子實體乙醇萃取液含量變化....................49
5.3.4 段木栽培之牛樟芝子實體乙醇萃取液含量變化........................50
5.4 不同年份牛樟芝萃取液其腫瘤細胞生長之影響..........................62
5.4.1 不同年份牛樟芝萃取液對A-549 cells之影響：.....................62
5.4.1.1 不同年份紅樟芝萃取液對A-549 cells之影響.....................62
5.4.1.2 不同年份白樟芝萃取液對A-549 cells之影響 .....................63
5.4.2 不同年份牛樟芝萃取液對HeLa cells之影響：......................69
5.4.2.1 不同年份紅樟芝萃取液對HeLa cells之影響......................69
5.4.2.2 不同年份白樟芝萃取液對HeLa cells之影響......................70
5.4.3 不同年份牛樟芝萃取液對Hep 3B cells之影響：....................76
5.4.3.1 不同年份紅樟芝萃取液對Hep 3B cells之影響....................76
5.4.3.2 不同年份白樟芝萃取液對Hep 3B cells之影響....................76
5.5 不同年份牛樟芝萃取液與段木栽培之牛樟芝萃取液其腫瘤細胞生長之影響.....82
5.5.1 不同年份牛樟芝與段木栽培之牛樟芝萃取液對A-549 cells之影響：......82
5.5.1.1 不同年份紅樟芝萃取液對A-549 cells之影響.....................82
5.5.1.2 不同年份白樟芝萃取液對A-549 cells之影響 .....................83
5.5.1.3 段木栽培之牛樟芝萃取液對A-549 cells之影響....................83
5.5.2 不同年份牛樟芝與段木栽栽培牛樟芝萃取液對HeLa cells之影響：.......91
5.5.2.1 不同年份紅樟芝萃取液對HeLa cells之影響.......................91
5.5.2.2 不同年份白樟芝萃取液對HeLa cells之影響.......................91
5.5.2.3 段木栽培之牛樟芝萃取液對HeLa cells之影響.....................92
5.5.3 不同年份牛樟芝與段木栽栽培牛樟芝萃取液對Hep 3B cells之影響：.....99
5.5.3.1 不同年份紅樟芝萃取液對Hep 3B cells之影響.....................99
5.5.3.2 不同年份白樟芝萃取液對Hep 3B cells之影響.....................99
5.5.3.3 段木栽培之牛樟芝萃取液對Hep 3B cells之影響..................100
第六章 結論.......................................................107
參考文獻..........................................................109

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