臺灣博碩士論文加值系統

樟芝(Antrodia camphorata)，又名牛樟芝及樟芝，是台灣的一種藥用真菌，廣泛用於亞洲及歐洲國家的食品添加中，有預防癌症和保肝作用樟芝由其中空的牛樟樹幹內面長出，從樟芝萃取出的三萜類化合物具有很好的生物活性，進行有抗癌及血管舒張之功效。因此本研究以樟芝三萜類為指標，進行栽培條件及萃取方法之探討。研究中使用HPLC分析樟芝萃取出來的12種三萜類化合物，分析時利用J’sphere ODS-M80 C18管柱，以0.1%甲酸及Acetonitrile作為移動相，流速為1 mL/min，偵測波長為248 nm，注射體積為5 μL，並以0.25-4 mg/mL的濃度製作11種三萜類檢量線，探討在平面培養、液態培養及子實體中三萜類成份的差異性。

Antrodia camphorata (AC) (Syn: A. cinnamomea or Taiwanofungus camphorates), named “Niu-chang-chih” or “chang-chih” in Chinese, is a medicinal mushroom being widely used as food dietary supplement for cancer prevention and hepatoprotection in several Asian and European countries. AC is grown in inner cavity of the endemic species Cinnamomum kanehirae Hayata (Lauraceae). Previous studies on AC extracts as well as pure compounds revealed that it has huge range of bioactivities from anti-cancer to vasorelaxation. The chemistry of AC leads to the identification of more than hundred secondary metabolites. Among these, particular attention has been directed to triterpenoids which are reputed as the most potent that contribute to AC’s pharmacological efficacy. Therefore, triterpenoids are ideal marker for standardization of AC. The quantities of active triterpenoids in AC are mainly dependent on cultivation conditions, harvest period, and extraction methods. To evaluate the quality of AC, in this study, a simple and sensitive HPLC-UV separation method was developed for simultaneous determination of 12 triterpenoids in the extract of AC. Optimum separations were obtained with J’sphere ODS-M80 C18 column using gradient elution with 0.1% aqueous formic acid and acetonitrile as mobile phase, flow rate of 1 ml/min, detection wavelength at 248 nm and sample volume at 5 μL. This method produced linear responses for ten triterpenoids in the concentration ranges of 0.25–4 mg/ml. Our results showed that there were remarkable differences in triterpenoids contents from different AC samples such as culture plate, liquid culture, and fruiting bodies, etc.

中文摘要 I
ABSTRACT II
致謝 III
目錄 V
表目錄 VII
圖目錄 IX
第一章 前言 1
第二章 文獻回顧 2
2-1 牛樟樹的簡介 2
2-2 牛樟芝的簡介 3
2-3 樟芝分類 4
2-4 牛樟芝的命名 5
2-5 外觀型態 6
2-6 樟芝的成份分析 9
2-6-1 多醣體(Polysaccharides) 9
2-6-2 三萜類化合物(Triterpenoids) 10
2-6-3 超氧歧化酵素(Superoxide dismutase；SOD) 12
2-7 生長條件的影響 12
2-7-1 物理因素 12
2-7-1-1 溫度 12
2-7-1-2 pH值 13
2-7-1-3 攪拌與通氣 13
2-7-1-4 光照 14
2-7-2 化學因素 14
2-7-2-1 碳源 14
2-7-2-2 氮源 14
2-7-2-3 碳氮比(C/N) 15
2-7-2-4 無機鹽類 15
2-7-2-5 生長因子 15
2-7-2-6 油脂、脂肪酸添加物 16
第三章 牛樟芝之培養 24
3-1 牛樟芝平面培養 24
3-1-1 實驗材料 24
3-1-1-1 菌株來源 24
3-1-1-2 實驗用藥品 25
3-1-1-3 儀器設備 25
3-1-2 實驗方法 26
3-1-2-1 平面培養基製備與接菌活化 26
3-1-2-2 菌種保存 28
3-1-2-3 平面培養以不同培養基添加試驗 29
3-1-3 樟芝椴木培養 36
第四章 牛樟芝三萜類分析 39
4-1實驗材料與方法 39
4-1-1 HPLC分析用溶劑 39
4-1-2 儀器設備 39
4-1-3 HPLC三萜類分析條件 40
4 -2 牛樟芝指標三萜類標準品及檢量線 42
4-3 實驗分析前處理 57
4-3-1 牛樟芝菌絲體平面培養與培養基添加試驗 58
4-3-1-1 平面培養添加試驗樣品分析討論 71
4-3-2 LF公司提供之牛樟芝液態培養樣品分析 72
4-3-2-1 LF公司提供之液態培養牛樟芝菌絲體樣品討論 84
4-3-3 NW公司提供之牛樟芝子實體萃取液樣品分析 85
4-3-3-1 NW公司提供之牛樟芝子實體萃取液樣品討論 99
4-4 實際樣品定量分析 100
第五章 結果與展望 107
第六章 參考文獻 108
附錄 113
附錄一﹑NCYU提供之各種木粉及牛樟芝培養後樣品 113
附錄二﹑其他分析樣品 123
作者簡歷 127

表目錄
表.3-1 樟芝菌株編號與菌株來源 24
表.3-2 樟腦添加表 30
表.3-3 色氨酸添加表 30
表.3-4 樟腦加色氨酸添加表 31
表.3-5 御可康添加表 31
表. 4-1 牛樟芝三萜類滯留時間 41
表.4-2 P 1-21號牛樟芝菌絲體平面培養與培養基添加試驗定性表 69
表.4-3 P 1-21號牛樟芝菌絲體平面培養與培養基添加試驗定量表(mg/g) 70
表.4-4 LF 1-20號牛樟芝液態培養菌絲體定性表 82
表.4-5 LF 1-20號牛樟芝液態培養菌絲體定量表(mg/g) 83
表.4-6 NW 1-23號牛樟芝子實體萃取液定性表 97
表.4-7 NW 1-23號牛樟芝子實體萃取液定量表(mg/g) 98
表.4-8 GB2牛樟芝子實體(Dry basis) 100
表.4-9 GB2牛樟芝菌絲體(Dry basis) 101
表.4-10 牛樟芝平面培養(Dry basis) 102
表.4-11 NW膠囊(Dry basis) 103
表.4-12 SH膠囊(Dry basis) 104
表.4-13 GE菌絲體(Dry basis) 105
表.4-14 LF菌絲體(Dry basis) 106

圖目錄
圖.2-1 牛樟樹 3
圖.2-2 牛樟芝子實體 4
圖.2-3 牛樟芝子實體之顯微構造圖 7
圖.2-4 樟芝子實體原始新種發表中的擔孢子圖（吳，2002） 8
圖.2-5 β-(1→3)-D-葡聚糖結晶結構 17
圖.2-6 有抗腫瘤活性的具β-(1,6)分支的β-1,3-D-葡聚糖結構。 18
圖.2-7A樟芝發現的三萜類化合物(Cherng and Chiang,1995) 19
圖.2-7B 樟芝發現的三萜類化合物(陽，1996) 20
圖.2-7D樟芝發現的三萜類化合物(程，1994) 22
圖.2-7E樟芝發現的三萜類化合物(吳，1995) 23
圖.3-1 樟芝菌種平面培養 27
圖.3-2平面培養洋菜塊 28
圖.3-3 平面培養實驗流程圖 32
圖.3-4 平面培養分析流程圖 33
圖. 3-5 平面培養添加樟腦試驗(培養30天，24℃) 34
圖. 3-6 平面培養添加色氨酸試驗(培養30天，24℃) 34
圖.2-5 β-(1→3)-D-葡聚糖結晶結構 17
圖.2-6 有抗腫瘤活性的具β-(1,6)分支的β-1,3-D-葡聚糖結構。 18
圖.2-7A樟芝發現的三萜類化合物(Cherng and Chiang,1995) 19
圖.2-7B 樟芝發現的三萜類化合物(陽，1996) 20
圖.2-7D樟芝發現的三萜類化合物(程，1994) 22
圖.2-7E樟芝發現的三萜類化合物(吳，1995) 23
圖.3-1 樟芝菌種平面培養 27
圖.3-2平面培養洋菜塊 28
圖.3-3 平面培養實驗流程圖 32
圖.3-4 平面培養分析流程圖 33
圖. 3-5 平面培養添加樟腦試驗(培養30天，24℃) 34
圖. 3-6 平面培養添加色氨酸試驗(培養30天，24℃) 34
圖. 3-7 平面培養添加樟腦加色氨酸試驗(培養30天，24℃) 35
圖. 3-8 平面培養添加御可康試驗(培養30天，24℃) 35
圖3-9 樟芝椴木培養實驗流程. 37
圖3-10 樟芝椴木培養圖 38
圖.4-1 AC1標準品(1 mg/ mL)之HPLC圖譜 44
圖.4-2 Methyl antcinate B之檢量線圖譜. 44
圖.4-3 AC2標準品(1 mg/ mL)之HPLC圖譜 45
圖.4-4 Dehydroeburicoic acid之檢量線圖譜. 45
圖.4-5 AC3標準品(1 mg/ mL)之HPLC圖譜 46
圖.4-6 15α-acetyldehydrosulphurenic acid標準品之檢量線圖譜 46
圖.4-7 AC4標準品(4 mg/ mL)之HPLC圖譜 47
圖.4-8 3β,15α-dihydroxy lanosta-21-oic acid標準品之檢量線圖譜 47
圖.4-9 AC5標準品(1 mg/ mL)之HPLC圖譜 48
圖.4-10 Antcin B標準品之檢量線圖譜 48
圖.4-11 AC6標準品(0.25 mg/ mL)之HPLC圖譜 49
圖.4-12 Dehydrosulphurenic acid之檢量線圖譜. 49
圖.4-13 AC7標準品(1 mg/ mL)之HPLC圖譜 50
圖.4-14 Zhankuic acid C標準品之檢量線圖譜 50
圖.4-15 AC8標準品(1 mg/ mL)之HPLC圖譜 51
圖.4-16 Sulphurenic acid標準品之檢量線圖譜 51
圖.4-17 AC9標準品(1 mg/ mL)之HPLC圖譜 52
圖.4-18 ANTCIN A之檢量線圖譜 52
圖4-.19 AC10標準品(1 mg/ mL)之HPLC圖譜 53
圖4-.20 Antcin C之檢量線圖譜 53
圖.4-21 AC12標準品(1 mg/ mL)之HPLC圖譜 54
圖.4-22 Antcin K之檢量線圖譜 54
圖.4-15 AC1-6結構圖. 55
圖.4-27 AC7-12結構圖 56
圖.4-28 P-1平面培養標準條件HPLC圖譜 58
圖.4-29 P-2平面培養樟腦添加0.0025% HPLC圖譜. 58
圖.4-30 P-3平面培養樟腦添加0.00625% HPLC圖譜. 59
圖.4-31 P-4平面培養樟腦添加0.0125% HPLC圖譜 59
圖.4-32 P-5平面培養樟腦添加0.025% HPLC圖譜 60
圖.4-33 P-6平面培養樟腦添加0.05% HPLC圖譜 60
圖.4-34 P-7平面培養色氨酸添加0.0025% HPLC圖譜 61
圖.4-35 P-8平面培養色氨酸添加0.00625% HPLC圖譜 61
圖.4-36 P-9平面培養色氨酸添加0.0125% HPLC圖譜 62
圖.4-37 P-10平面培養色氨酸添加0.025% HPLC圖譜 62
圖.4-38 P-11平面培養色氨酸添加0.05% HPLC圖譜 63
圖.4-39 P-12平面培養色氨酸+樟腦添加0.0025% HPLC圖譜 63
圖.4-40 P-13平面培養色氨酸+樟腦添加0.00625% HPLC圖譜 64
圖.4-41 P-14平面培養色氨酸+樟腦添加0.0125% HPLC圖譜 64
圖.4-42 P-15平面培養色氨酸+樟腦添加0.025% HPLC圖譜 65
圖.4-43 P-16平面培養色氨酸+樟腦添加0.05% HPLC圖譜 65
圖.4-44 P-17平面培養御可康添加0.0025% HPLC圖譜 66
圖.4-45 P-18平面培養御可康添加0.00625% HPLC圖譜 66
圖.4-46 P-19平面培養御可康添加0.0125% HPLC圖譜. 67
圖.4-47 P-20平面培養御可康添加0.025% HPLC圖譜 67
圖.4-48 P-21平面培養御可康添加0.05% HPLC圖譜 68
圖.4-49 LF-1液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 72
圖.4-50 LF-2液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 72
圖.4-51 LF-3液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 73
圖.4-52 LF-4液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 73
圖.4-53 LF-5液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 74
圖.4-54 LF-6液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 74
圖.4-55 LF-7液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 75
圖.4-56 LF-8液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 75
圖.4-57 LF-9液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 76
圖.4-58 LF-10液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 76
圖.4-59 LF-11液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 77
圖.4-60 LF-12液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 77
圖.4-61 LF-13液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 78
圖.4-62 LF-14液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 78
圖.4-63 LF-15液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 79
圖.4-64 LF-16液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 79
圖.4-65 LF-17液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 80
圖.4-66 LF-18液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 80
圖.4-67 LF-19液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 81
圖.4-68 LF-20液態培養牛樟芝菌絲體HPLC圖譜 81
圖.4-69 NW-1牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 85
圖.4-70 NW-2牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 85
圖.4-71 NW-3牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 86
圖.4-72 NW-4牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 86
圖.4-73 NW-5牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 87
圖.4-74 NW-6牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 87
圖.4-75 NW-7牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 88
圖.4-76 NW-8牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 88
圖.4-77 NW-9牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 89
圖.4-78 NW-10牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 89
圖.4-79 NW-11牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 90
圖.4-80 NW-12牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 90
圖.4-81 NW-13牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 91
圖.4-82 NW-14牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 91
圖.4-83 NW-15牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 92
圖.4-84 NW-16牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 92
圖.4-85 NW-17牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 93
圖.4-86 NW-18牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 93
圖.4-87 NW-19牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 94
圖.4-88 NW-20牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 94
圖.4-89 NW-21牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 95
圖.4-90 NW-22牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 95
圖.4-91 NW-23牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 96
圖.4-92 GB2牛樟芝子實體萃取液HPLC圖譜 100
圖.4-93 GB2牛樟芝菌絲體萃取液HPLC圖譜 101
圖.4-94 牛樟芝平面培養HPLC圖譜 102
圖.4-95 NW膠囊HPLC圖譜 103
圖.4-96 SH膠囊HPLC圖譜 104
圖.4-97 GE菌絲體HPLC圖譜 105
圖.4-98 LF菌絲體HPLC圖譜 106

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