臺灣博碩士論文加值系統

在現今的食品當中，潛藏著許多對人體造成健康危害的毒素，這些毒素來源有：黴菌毒素、細菌類毒素、重金屬毒素、農藥和化學污染等等，對人體可是造成疾病的發生。其中黃麴毒素AFB1為黴菌毒素的一種，主要污染來源為豆類食品。在毒性上，相對於其它具有相似結構的黃麴毒素，被認為是毒性較強的黴菌毒素。從文獻上，也發現在真菌類當中，具有其降低AFB1毒性的解毒酵素，反應後發現在螢光下偵測其AFB1吸收值降低。因此在實驗研究中，也希望能從真菌類樟芝發酵中，找出具有可降低AFB1毒性的解毒酵素。
本研究以樟芝Antrodia camphorata BCRC 35396於氣舉式發酵槽培養下，找尋具有降低毒素毒性的解毒酵素，其反應上造成AFB1螢光降低，並將發酵液進行酵素分離純化。
解毒酵素的純化步驟是將發酵澄清液利用硫酸銨沉降、透析，再經過DEAE Sepharose陰離子交換管柱層析分離純化。最後由SDS-PAGE電泳分析，找出此解毒酵素分子量為54kDa。
在反應部份，則是將純化之酵素與AFB1反應，利用AFB1在螢光excitation 365nm偵測下，emission 420nm 會有吸收值，來作為判斷毒素反應變化情況。

第一章 緒論…………………………………………………………….1
1-1研究動機………………………………………………………..1
1-2研究目的………………………………………………………..2
第二章 文獻回顧………………………………………………………..3
2.1菇類的介紹…….………………………………………………..3
2.2樟芝……………………………………………………………...3
2.2.1分類…………….…………………………………………...3
2.2.2型態…………………………………..……………….…….4
2.2.3成分……………..…………………………………………..6
2.2.4功用…………………………………………………………6
2.2.5樟芝之藥理作用……………………………………………7
2.3黃麴毒素……………………………………………………….10
2.3.1黃麴毒素簡介……………………………………………..10
2.3.2黃麴毒素結構……………………………………………11
2.3.3黃麴毒素分析方法…..………………………………......12
2.4解毒酵素………………………………………………………13
2.4.1酵素簡介………………………………………………….13
2.4.2解毒酵素與黃麴毒素反應………………………………..16
2.5酵素之分離與純化…………………………………………….19
2.5.1濃縮方法…………………………………………………..19
2.5.1.1離心…………………………………………………...19
2.5.1.2超微薄膜過濾法……………………………………...20
2.5.1.3其他濃縮方法…………………………………….......21
2.5.1.4層析法…………………………………………….......21
2.5.1.4.1離子交換管柱層析…………………………........22
2.5.1.4.2疏水性作用管柱層析……………………………23
2.5.1.4.3親和性作用管柱層析……………………………23
2.5.1.4.4膠體過濾管柱層析………………………………24
2.5.2快速蛋白質液相層析儀(FPLC)………………….....24
第三章 實驗材料與方法………………………………………………26
3.1實驗材料……………………………………………………….26
3.1.1實驗菌株…………………………………………………..26
3.1.2實驗藥品…………………………………………………..26
3.1.3實驗儀器及其他設備…………………………………….27
3.1.4實驗裝置.............................................................................28
3.2實驗方法………………………………………………….........29
3.2.1菌株保存…………………………………………………..29
3.2.2培養基組成.………………………………………………29
3.2.3操作條件…………………………………………………..30
3.2.4分析方法…………………………………………………..31
1.發酵液處理流程……………………………………………..31
2.菌重分析………………………………………………………32
3.葡萄糖殘量分析……………………………………………....32
4.硫酸銨沉降……………………………………………………33
5.管柱層析………………………………………………….........36
6.解毒酵素與AFB1反應分析方法……………………………..37
7.蛋白質含量測定.........................................................................38
8.SDS膠體電泳（SDS-PAGE）……………………………......39
第四章 結果與討論…………………………………………………......43
4.1樟芝菌絲型態…………………………………………………..43
4.1.1固態培養……………………………………………………43
4.1.2搖瓶培養……………………………………………………44
4.1.3氣舉式發酵槽………………………………………………44
4.2發酵槽實驗……………………………….................................46
4.3黃麴毒素AFB1分析……………………………………… ..….47
4.4解毒酵素之純化………………………………………..………48
4.4.1解毒酵素純化動機………………………………………..48
4.4.2發酵澄清液………………………………………………..50
4.4.3陰離子交換管柱層析……………………………………..51
4.4.4 SDS膠體電泳（SDS-PAGE）……………………………52
4.5 解毒酵素與AFB1反應分析………………………………….54
第五章 結論與未來展望……………………………………………….55
5-1結論……………………………………………………………..55
5-2未來建議………………………………………………………..56
參考文獻………………………………………………………………....57

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