臺灣博碩士論文加值系統

本研究主要利用福州杉(China Fir)椴木培養樟芝子實體(Antrodia cinnamomea)探討其生長情形，並分析生長於牛樟椴木及福州杉椴木上子實體之粗三萜、清除DPPH能力及HPLC圖譜分析之差異，結果顯示，利用福州杉所培養出之子實體其粗三萜含量為3.25%並且清除DPPH能力67.25% (0.01mg/ml) ，相較於利用牛樟椴木培養之子實體粗三萜含量為4.31%、清除DPPH能力72.31% (0.01mg/ml) 都要來的低，並由HPLC圖譜分析上顯示所內含的成分也有些許之差異性存在。
為了將福州杉上所生長之子實體三萜分離並加以純化，利用超音波輔助萃取，在不同的酒精濃度(%)、溫度(℃)、固液比(g/ml)對三萜之萃取都有其影響，並由反應曲面法可得知其最適化萃取條件，分別為酒精濃度74.38%、溫度60.41℃、固液比1g/104.81ml 時可達到最佳萃取樟芝三萜之效果。
並在分離萃取液中不同之三萜化合物，利用分子模板技術將其三萜分離，因此在選用squalene作為模板時，分離效果可達到68.47%，而利用18-β-Glycyrrhetinic acid作為模板時分離效果可達至85.31%，綜合結果顯示，人工培育方式亦可於福州杉上培育出樟芝子實體，並藉由分子模板技術，進行有效性成份之專一性分離，藉此提升樟芝子實體產量及其藥廠製藥之應用價值。

This work focuses primarily on the growth and development of Antrodia cinnamomea fruiting bodies on China fir. We also analyzed the triterpenoids isolated from the fruiting bodies of A. cinnamomea and investigated their ability to scavenge DPPH by HPLC mapping analysis to identify the differences in the compositions of the fruiting bodies.
Previous studies have shown that fewer fruiting bodies grow upon culture with China fir, yielding a triterpenoid level of 3.25% and a DPPH scavenging power of 67.25% (0.01 mg/ml), than upon culture with A. cinnamomea, yielding a triterpenoid level of 4.31% and a DPPH scavenging power of 72.31% (0.01 mg/ml). HPLC mapping analysis also revealed a number of differences in their composition.
We used ultrasound techniques to efficiently extract and purify triterpenoids from fruiting bodies growing on China fir and found that different alcohol concentrations, temperatures, and liquid-to-solid ratios determine the efficiency of the triterpenoid extraction. Using a reverse methodology, we achieved the most efficient conditions using an alcohol concentration of 74.38%, a temperature of 60.41°C, and a liquid-to-solid ratio of 1 g/104.81 ml.
We used a molecular template technique to effectively separate different triterpenoid compounds within different extractions. Separation rates of 68.47% and 85.31% were achieved using squalene and 18-β-glycyrrhetinic acid as the molecular templates, respectively.
Our results show that A. cinnamomea fruiting bodies can be cultured artificially on China fir. Useful components can be effectively separated using the molecular template technique, thus enhancing the productivity and pharmaceutical value of A. cinnamomea fruiting bodies.

封面內頁
簽名頁
中文摘要iii
英文摘要iv
誌謝v
目錄vi
圖目錄ix
表目錄xi

1.前言1
2.文獻回顧2
2.1牛樟芝介紹2
2.1.1牛樟芝基本概述2
2.1.2牛樟芝分類3
2.1.3牛樟芝子實體4
2.2牛樟芝生理活性成分7
2.2.1牛樟芝三萜類別7
2.2.2三萜類生理活性10
2.3牛樟芝藥用價值10
2.4其他活性成分12
2.4.1超氧岐化酶(SOD)12
2.4.2核酸類13
2.5牛樟芝人工培養13
2.6椴木栽培14
2.7福州杉14
2.8不同萃取方式15
2.8.1熱迴流萃取15
2.8.2微波輔助萃取15
2.8.3超臨界流體萃取17
2.8.4超音波萃取17
2.9分子模板之簡介18
3.材料與方法20
3.1材料與試藥20
3.2儀器20
3.3實驗方法21
3.3.1實驗流程21
3.3.2菌種培養21
3.3.2.1試管斜面培養21
3.3.2.2培養皿平板培養21
3.3.2.3液態培養23
3.3.3樟芝椴木培育24
3.3.4樟芝子實體生物活性檢測24
3.3.4.1三萜類化合物含量分析24
3.3.4.2HPLC分析條件24
3.3.4.3清除DPPH能力探討26
3.4最適化超音波萃取條件探討26
3.5統計分析29
3.6分子模板29
3.6.1分子模板製備30
4.1椴木栽培35
4.1.1福州杉與牛樟椴木生長情形35
4.1.2生長差異性35
4.1.3三萜含量差異42
4.1.4清除α-diphenyl-β-picrylhydrazyl (DPPH)能力42
4.1.5HPLC分析兩者差異43
4.2不同萃取條件之比較44
4.2.1不同濃度乙醇萃取之差異44
4.2.2清除DPPH能力50
4.2.3HPLC分析50
4.3超音波萃取最適化條件60
4.4分子模板分離三萜化合物61
5.結論71
參考文獻72

圖目錄
圖1、樟芝在生物學上的分類地位 6
圖2、樟芝子實體中Ergostane型化合物8
圖3、樟芝子實體中Lanostane型化合物9
圖4、分子模板示意圖 19
圖5、超音波輔助萃取裝置22
圖6、實驗流程圖25
圖7、椴木栽培模組27
圖8、最適化萃取實驗流程圖31
圖9、分子模板製備流程圖34
圖10、一個月後牛樟椴木上樟芝菌生長情形36
圖11、一個月後福州杉椴木上樟芝菌生長情形37
圖12、三個月後牛樟椴木上樟芝菌生長情形38
圖13、三個月後福州杉椴木上樟芝菌生長情形39
圖14、六個月後牛樟椴木上樟芝菌生長情形40
圖15、六個月後福州杉椴木上樟芝菌生長情形41
圖16、牛樟芝與福州杉子實體總三萜比較45
圖17、清除DPPH能力比較(A)牛樟芝子實體(B)福州杉子實體46
圖18、野生牛樟芝子實體HPLC圖譜分析47
圖19、乙醇萃取牛樟椴木栽培之子實體HPLC圖譜分析48
圖20、乙醇萃取福州杉椴木栽培之子實體HPLC圖譜分析49
圖21、不同濃度萃取溶劑及不同萃取時間樟芝萃取液顏色變化51
圖22、不同萃取方式於不同時間點總三萜之變化53
圖23、一次萃取後子實體三萜含量54
圖24、不同濃度之萃取溶劑清除DPPH能力55
圖25、利用熱水分別萃取10、30、60 min之萃取液HPLC分析圖譜(紅)10min(黑)30min(藍)60min56
圖26、利用50%乙醇分別萃取10、30、60 min之萃取液HPLC分析圖譜(紅)10min(黑)30min(藍)60min57
圖27、利用95%乙醇分別萃取10、30、60 min之萃取液HPLC分析圖譜(紅)10min(黑)30min(藍)60min58
圖28、熱水萃(紅)、50% 乙醇(黑)及95%乙醇(藍)之萃取60min後萃取液HPLC圖譜分析59
圖29、萃取樟芝子實之三萜含量實驗值與觀測值比較模型63
圖30、固定酒精濃度50%條件下固液比與溫度對樟芝三萜萃取影響之反應曲面圖64
圖31、固定溫度50℃條件下固液比與酒精濃度對樟芝三萜萃取影響之反應曲面圖65
圖32、固定固液比1/100 (g/ml)條件下酒精濃度與溫度對樟芝三萜萃取影響之反應曲面圖66
圖33、不同分子模板之專一性吸附率探討69

表目錄
表1、牛樟樹分布劃分 5
表2、牛樟芝培育方法及其差異性比較16
表3、HPLC分析條件28
表4、三階層三變數之實驗設計反應參數32
表5、三階層三變數之Box-behnken實驗設計33
表6、不同萃取溶劑及萃取時間之Lab值52
表7、三階層三變因對於樟芝子實體萃取三萜含量之影響62
表8、三階層三變因條件下最佳萃取條件68
表9、不同分子模板在樟芝萃取液中之吸附效果70

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