臺灣博碩士論文加值系統

摘要
中草藥在傳統療法上扮演著重要的角色，然而可以利用生物技術提高中草藥功能及其價值。本實驗是選用魚腥草和枸杞，利用兩種不同的萃取方式，第一為打汁魚腥草萃取液（HG）與打汁枸杞萃取液（LG），第二為水煮魚腥草萃取（HW）與水煮枸杞萃取液（LW），兩種中草藥經不同方式所得的萃取液當做培養基，利用紅茶菇、巴西蘑菇及樟芝發酵，在發酵過後，取其發酵產物，做抗氧化能力測試及對腫瘤細胞生長抑制之影響。同時與萃取原液及原菌種發酵液做比較。由結果中發現LW經由紅茶菇發酵後所得發酵液其抗氧化能力及抑殺腫瘤細胞能力較LW原液及原紅茶菇發酵液有明顯增強的趨勢，然而枸杞萃取液與魚腥草萃取液搭配樟芝與巴西蘑菇所得之發酵產物與萃取原液及原菌種發酵液比較則無明顯的效果提升。雖然從結果顯示中草藥（枸杞、魚腥草）發酵產物其抗氧化能力與抗腫瘤細胞能力並非所有的中草藥與菌種的搭配均得以提昇，但是可以更進一步探討在其他如免疫能力，細胞抗氧化能力......等功能性的效果。

關鍵字：魚腥草、枸杞、樟芝、巴西蘑菇、紅茶菇、抗氧化、抗腫瘤

Abstract
The Chinese herbal medicines play important role on traditional remedy. The value of Chinese herbal medicines can be further upgraded by biotechnology. The purpose of this study was to examine the antioxidant activity and anticancer activity of fermented products with different extractions of herbs, Houttuynia cordata Thunb and Lycium halimifolium, as substrates and fermented by Antrodia Camphorata, Agaricus blazei and tea fungus. It has two ways to extract herbs. That is the extraction by grinding Houttuynia cordata Thunb （HG）and Lycium halimifolium（LG）,or the hot water extraction of Houttuynia cordata Thunb （HW）and Lycium halimifolium（LW）. The result showed that antioxidant and anticancer activities of the fermented product of LW fermented by tea fungus were higher than activities of the original LW without fermentetion and the fermented product of tea fungus without LW. Novertheless, the activities of the fermented products of Antrodia Camphorata and Agaricus blazei cultured with HG, LG, HW and LW were not enhanced. Although the antioxidant and anticancer activities of the fermented herbal extracts were not enhanced in all aspects the results do proivde certain information for further investigation.

keyword：Houttuynia cordata Thunb
Lycium halimifolium
Antrodia Camphorata
Agaricus blazei
tea fungus
antioxidant activity
anticancer activity.

目次
摘要…………………………………………………………………………………………….I
ABSTRACT…………………………………………………………………………………..II
誌謝 …………………………………………………………………………………………III
目次 …………………………………………………………………………………………IV
表目錄 ……………………………………………………………………………………..VII
圖目錄……………………………………………………………………………………...VIII
第一章 前言…………………………………………………………………………………..1
1.1背景……………………………………………………………………………………1
1.2研究目的………………………………………………………………………………1
1.3 研究內容……………………………………………………………………………...1
第二章 文獻整理……………………………………………………………………………..2
2.1 枸杞的介紹…………………………………………………………………………...2
2.2 魚腥草的介紹………………………………………………………………………...3
2.3紅茶菇的介紹…………………………………………………………………………5
2.4巴西蘑菇介紹…………………………………………………………………………6
2.5樟芝介紹………………………………………………………………………………6
2.6抗氧化介紹……………………………………………………………………………7
2.6.1自由基…………………………………………………………………………...7
2.6.2活性氧與自由基形成………………………………………………………….10
2.6.3自然界中抗氧化劑的種類…………………………………………………….13
2.6.3.1生育醇（tocopherol）………………………………………………….13
2.6.3.2類黃酮（flavonoids）………………………………………………….14
2.6.3.3類胡蘿蔔素（carotenoids）……………………………………………14
2.6.3.4抗壞血酸（ascorbic acid）……………………………………………..14
2.6.3.5生物鹼類化合物（alkaloids）………………………………………….15
第三章 材料與方法…………………………………………………………………………16
3.1實驗材料……………………………………………………………………………..16
3.1.1中草藥………………………………………………………………………….16
3.1.2菌體…………………………………………………………………………….16
3.1.3細胞株………………………………………………………………………….16
3.1.4藥品…………………………………………………………………………….16
3.1.5儀器設備………….……………………………………………………………17
3.2實驗方法……………………………………………………………………………..17
3.2.1中草藥的萃取………………………………………………………………….17
3.2.2搖瓶試驗……………………………………………………………………….18
3.2.2.1紅茶菇液態發酵………………………………………………………..19
3.2.2.2巴西蘑菇液態發酵……………………………………………………..19
3.2.2.3樟芝液態發酵…………………………………………………………..19
3.2.3菌絲體乙醇萃取之製備……………………………………………………….20
3.3抗氧化性質分析……………………………………………………………………..20
3.3.1樣品的製備…………………………………………………………………….20
3.3.2捕捉DPPH能力之測定……………………………………………………….20
3.3.3清除H2O2能力測試……………………………………………………………20
3.3.4還原能力測試………………………………………………………………….21
3.4細胞株測試…………………………………………………………………………..21
3.4.1培養條件及細胞分盤………………………………………………………….21
3.4.1.1培養條件………………………………………………………………..21
3.4.1.2繼代培養………………………………………………………………..21
3.4.1.3細胞分盤………………………………………………………………..22
3.4.2細胞抑殺試驗（MTS assay）…………………………………………………22
3.4.2.1原理……………………………………………………………………..22
3.4.2.1方法……………………………………………………………………..23
3.4.2.2細胞存活率分析………………………………………………………..23
第四章結果與討論…………………………………………………………………………..25
4.1生長曲線……………………………………………………………………………..25
4.1.1紅茶菇………………………………………………………………………….25
4.1.2巴西蘑菇……………………………………………………………………….25
4.1.3樟芝…………………………………………………………………………….25
4.2抗氧化性之分析……………………………………………………………………..26
4.2.1捕捉DPPH之能力……………………………………………………………26
4.2.1.1魚腥草………………………………………………………………….26
4.2.1.2枸杞…………………………………………………………………….27
4.2.2清除H2O2能力………………………………………………………………..29
4.2.2.1魚腥草………………………………………………………………….29
4.2.2.2枸杞……………………………………………………………………..29
4.2.3還原能力測試………………………………………………………………….32
4.3腫瘤細胞株測試……………………………………………………………………..34
4.3.1魚腥草與枸杞不同方式萃取液，加入樟芝、巴西蘑菇及紅茶菇所得發酵產
物對於人類肺癌細胞（A549之影響）。…………………………………….34
4.3.1.1魚腥草…………………………………………………………………..34
4.3.1.2枸杞……………………………………………………………………..36
4.3.2魚腥草與枸杞不同方式萃取液，加入樟芝、巴西蘑菇及紅茶菇所得發酵產
物對於人類大腸癌細胞（HCT-8）之影響。……………………………….38
4.3.2.1魚腥草…………………………………………………………………..38
4.3.2.2枸杞……………………………………………………………………..39
4.3.3魚腥草與枸杞不同方式萃取液，加入樟芝、巴西蘑菇及紅茶菇所得發酵產
物對於人類正常肝細胞（Chang liver之影響）。……………………………41
4.3.3.1魚腥草…………………………………………………………………..41
4.3.3.2枸杞……………………………………………………………………..43
第五章 結論………………………………………………………………………………....82
參考文獻……………………………………………………………………………………..84








表目錄
表一 老化的原因……………………………………………………………………………..8
表二 不同方式萃取之魚腥草與枸杞萃取原液、原菌種之發酵液及三種菌株搭配不同方
式萃取之魚腥草與枸杞萃取液培養之後所得發酵液經冷凍乾燥，菌絲體萃取液經真空乾燥後所得每毫升（ml）中固型物之重量（mg）……………………….……..24
表三 不同方式之魚腥草與枸杞萃取原液、原菌種之發酵液級三種菌種搭配不同方式萃
取之魚腥草與枸杞萃取液培養後所得發酵液清除DPPH能力各種原液與發酵液之IC50量（mg/ml）………………………………………………………………………..54
表四 不同方式之魚腥草與枸杞萃取原液、原菌種之發酵液級三種菌種搭配不同方式萃
取之魚腥草與枸杞萃取液培養後所得發酵液清除H2O2能力各種原液發酵液IC50量（mg/ml）……………………………………………………………………………62
表五 不同中草藥萃取原液不同濃度之還原能力。…………………………..…………..63
表六 不同中草藥萃取液與紅茶菇共同培養後所得發酵液不同濃度之還原力。………63
表七 不同中草藥萃取液與巴西蘑菇共同培養後所得發酵液不同濃度之還原能力，表格
中為吸光值（700 nm），吸光值高代表還原能力強。…………………………..….64
表八 不同中草藥萃取液與樟芝共同培養後所得發酵液不同濃度之還原能力。……….64
表九 不同中草藥萃取液與樟芝共同培養後所得菌絲體乙醇萃取液不同濃度之還原能
力。……………………………………………………………………………………65
表十. 魚腥草草與枸杞不同方式萃取液，加入樟芝、巴西蘑菇及紅茶菇所得發酵
產物對於人類肺癌細胞（A549 ）之影響。…………………………………….…66
表十一. 魚腥草與枸杞不同方式萃取液，加入樟芝、巴西蘑菇及紅茶菇所得發酵
產物對於人類大腸癌細胞（HCT-8）之影響。…………………………………….71
表十二. 魚腥草與枸杞不同方式萃取液，加入樟芝、巴西蘑菇及紅茶菇所得發酵產物對於人類正常肝細胞（Chang liver之影響）。. ……………………………………..76






圖目錄
圖1-1 自由基學說概要………………………………………………………………………9
圖1-2 氧分子之氧化還原及激發狀態……………………………………………………..12
圖4-1 紅茶菇之生長曲線，利用LB培養基，在靜置，溫度30℃之環境中，每4小時
測其吸光值，直到150小時。………………………………………………………45
圖4-2 巴西蘑菇生長曲線，利用搖瓶加入PD培養基，在轉速為150 rpm，27℃環境中
培養，以每天2天為一單位測得菌絲體乾菌重。……………………………….45
圖4-3 樟芝之生長曲線利用搖瓶加入MY培養基，在轉速為150 rpm，27℃環境中培養，
以每天2天為一單位測得菌絲體乾菌重。……………………………………….45
圖4-4 打汁魚腥草萃取原液對捕捉DPPH能力圖。…………………………………….46
圖4-5 水煮魚腥草萃取原液對捕捉DPPH能力圖……………………………………….46
圖4-6 打汁魚腥草萃取液跟紅茶菇進行培養後之發酵液對捕捉DPPH能力圖。……...46
圖4-7 水煮魚腥草萃取液跟紅茶菇進行培養後之發酵液對捕捉DPPH能力圖。………47
圖4-8打汁魚腥草萃取液跟巴西蘑菇進行培養後之發酵液對捕捉DPPH能力圖。……..47
圖4-9水煮魚腥草萃取液跟巴西蘑菇進行培養後之發酵液對捕捉DPPH能力圖。…...47
圖4-10 打汁魚腥草萃取液跟樟芝進行培養後之發酵液對捕捉DPPH能力圖。………..48
圖4-11 水煮魚腥草萃取液跟樟芝進行培養後之發酵液對捕捉DPPH能力圖。………..48
圖4-12 打汁魚腥草萃取液跟樟芝進行培養後之菌絲體乙醇萃取物對捕捉DPPH能力
圖。………………………………………………………………………………….48
圖4-13 水煮魚腥草萃取液跟樟芝進行培養後之菌絲體乙醇萃取物對捕捉DPPH能力
圖。………………………………………………………………………………….49
圖4-14 打汁枸杞萃取原液對捕捉DPPH能力圖。……………………………………….49
圖4-15 水煮枸杞萃取原液對捕捉DPPH能力圖。……………………………………….49
圖4-16 打汁枸杞萃取液跟紅茶菇進行培養後之發酵液對捕捉DPPH能力圖。………50
圖4-17 水煮枸杞萃取液跟紅茶菇進行培養後之發酵液對捕捉DPPH能力圖。………50
圖4-18 打汁枸杞萃取液跟巴西蘑菇進行培養後之發酵液對捕捉DPPH能力圖。……50
圖4-19 水煮枸杞萃取液跟巴西蘑菇進行培養後之發酵液對捕捉DPPH能力圖。…..….51
圖4-20 打汁枸杞萃取液跟樟芝進行培養後之發酵液對捕捉DPPH能力圖。………….51
圖4-21 水煮枸杞萃取液跟樟芝進行培養後之發酵液對捕捉DPPH能力圖。…………51
圖4-22 打汁枸杞萃取液跟樟芝進行培養後之菌絲體乙醇萃取液對捕捉DPPH能力圖。
………………………………………………………………………………………52
圖4-23 水煮枸杞萃取液跟樟芝進行培養後之菌絲體乙醇萃取液液對捕捉DPPH能力圖
………………………………………………………………………………………52
圖4-24 紅茶菇利用LB培養基所得發酵液對捕捉DPPH能力圖。…………………….52
圖4-25 巴西蘑菇利用PD培養基培養所得發酵液。…………………………………….53
圖4-26 樟芝利用MY培養基所得發酵液對捕捉DPPH能力圖。………………………53
圖4-27 樟芝利用MY培養基所得菌絲體乙醇萃取液對捕捉DPPH能力圖。………….53
圖4-28 打汁魚腥草萃取原液對於清除H2O2能力圖……………………………………..55
圖4-29 水煮魚腥草萃取原液對於清除H2O2能力圖……………………………………...55
圖4-30 打汁魚腥草萃取液經紅茶菇進行培養後之發酵液對清除H2O2能力圖………..55
圖4-31 水煮魚腥草萃取液經紅茶菇進行培養後之發酵液對清除H2O2能力圖………...56
圖4-32 打汁魚腥草萃取液經巴西蘑菇進行培養後之發酵液對清除H2O2能力圖……..56
圖4-33 水煮魚腥草萃取液經巴西蘑菇進行培養後之發酵液對清除H2O2能力圖……...56
圖4-34 打汁魚腥草萃取液經樟芝進行培養後之發酵液對清除H2O2能力圖…………..57
圖4-35 水煮魚腥草萃取液經樟芝進行培養後之發酵液對清除H2O2能力圖…………...57
圖4-36 打汁枸杞萃取原液對於清除H2O2能力圖………………………………………..57
圖4-37 水煮枸杞萃取原液對於清除H2O2能力圖………………………………………..58
圖4-38 打汁枸杞萃取液經紅茶菇進行培養後之發酵液對清除H2O2能力圖…………..58
圖4-39 水煮枸杞萃取液經紅茶菇進行培養後之發酵液對清除H2O2能力圖…………..58
圖4-40 打汁枸杞萃取液經巴西蘑菇進行培養後之發酵液對清除H2O2能力圖………...59
圖4-41 水煮枸杞萃取液經巴西蘑菇進行培養後之發酵液對清除H2O2能力圖………..59
圖4-42 打汁枸杞萃取液經樟芝進行培養後之發酵液對清除H2O2能力圖……………..59
圖4-43 水煮枸杞萃取液經樟芝進行培養後之發酵液對清除H2O2能力圖……………..60
圖4-44 紅茶菇利用LB培養基所得發酵液對清除H2O2能力圖。………………………60
圖4-45 巴西蘑菇利用PD培養基所得發酵液對清除H2O2能力圖。……………………60
圖4-46 樟芝利用MY培養基所得發酵液對清除H2O2能力圖…………………………..61
圖4-47 樟芝與不同魚腥草萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類肺癌細胞
（A549）影響圖。…………………………………………………………………67
圖4-48 樟芝與不同魚腥草萃取液及進行發酵後所得菌絲體乙醇萃取液液對於人類肺癌
細胞（A549）影響圖。……………………………………………………………….67
圖4-49 巴西蘑菇與不同魚腥草萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類肺癌細
胞（A549）影響圖。………………………………………………………………68
圖4-50 紅茶菇與不同魚腥草萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類肺癌細胞
（A549）影響圖。…………………………………………………………………68
圖4-51 樟芝與不同枸杞萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類肺癌細胞
（A549）影響圖。…………………………………………………………………..69
圖4-52 樟芝與不同枸杞萃取液進行發酵後所得菌絲體乙醇萃取液對於人類肺癌細胞
（A549）影響圖。…………………………………………………………………69
圖4-53 巴西蘑菇與不同枸杞萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類肺癌細胞
（A549）影響圖。…………………………………………………………………70
圖4-54 紅茶菇與不同枸杞萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類肺癌細胞
（A549）影響圖。………………………………………………………………….70
圖4-55 樟芝與不同魚腥草萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類大腸癌細胞
（HCT-8）影響圖。………………………………………………………………..72
圖4-56 樟芝與不同魚腥草萃取液之原液及進行發酵後所得菌絲體乙醇萃取液對於人類
大腸癌細胞（HCT-8）影響圖。…………………………………………….……72
圖4-57 巴西蘑菇與不同魚腥草萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類大腸癌
細胞（HCT-8）影響圖。………………………………………………………….73
圖4-58 紅茶菇與不同魚腥草萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類大腸癌細
胞（HCT-8）影響圖。…………………………………………………………….73
圖4-60 樟芝與不同枸杞萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類大腸癌細胞
（HCT-8）影響圖。…………………………………………………………………74
圖4-61 樟芝與不同枸杞萃取液之原液及進行發酵後所得菌絲體乙醇萃取液液對於人類
大腸癌細胞（HCT-8）影響圖。………………………………………………….74
圖4-62 巴西蘑菇與不同枸杞萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類大腸癌細
胞（HCT-8）影響圖。…………………………………………………………….75
圖4-63 紅茶菇與不同枸杞萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類大腸癌細胞
（HCT-8）影響圖。……………………………………………………………….75

圖4-64 樟芝與不同魚腥草萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類正常肝細胞
（Chang liver）影響圖。……………………………………………………………77
圖4-65 樟芝與不同魚腥草萃取液之原液及進行發酵後所得菌絲體乙醇萃取液對於人類
正常肝細胞（Chang liver）影響圖。………………………………………….….77
圖4-66 巴西蘑菇與不同魚腥草萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類正常肝
細胞（Chang liver）影響圖。……………………………………………………..78
圖4-67 紅茶菇與不同魚腥草萃取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類正常肝細
胞（Chang liver）影響圖。…………………………………………………………78
圖4-68 樟芝與不同枸杞取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類正常肝細胞
（Chang liver）影響圖。…………………………………………………………….79
圖4-69 樟芝與不同枸杞萃取液之原液及進行發酵後所得菌絲體乙醇萃取液對於人類正
常肝細胞（Chang liver）影響圖。………………………………………………..79
圖4-70 巴西蘑菇與不同枸杞取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類正常肝細胞
（Chang liver）影響圖。…………………………………………………………..80
圖4-71 紅茶菇與不同枸杞取液之原液及進行發酵後所得發酵液對於人類正常肝細胞
（Chang liver）影響圖。……………………………………………………………80

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