臺灣博碩士論文加值系統

　　牛樟芝 ( Taiwanofungus camphoratus = Antrodia camphorata = Antrodia cinnamomea ) 為食用藥用菇，只生長在台灣特有的牛樟樹（Cinnamomum kanehirae）內，屬於擔子菌門 ( Basidiomycota ) 、無褶菌目 ( Aphyllophorales ) 、多孔菌科 ( Polyporaceae )。在民間盛傳牛樟芝的功效頗多，其最令人注意的是保肝、抗癌以及抗腫瘤效果，而目前所知的是牛樟芝所含的三萜類為保健主要成分。 牛樟芝僅生長在台灣特有的保育類植物牛樟樹，因為只生長在牛樟樹上，導致被大量盜伐瀕臨絕種。本研究探討以其他木材來代替牛樟木培養牛樟芝菌種，進而分析成分與活性。
　　初步以木屑萃取物加入培養基中觀察牛樟芝生長情形，培養30天之後顯示牛樟樹木屑、冇樟木屑，6%香樟木屑的水萃物培養基均生長到7cm以上，而酒萃物培養基則以冇樟木屑培養基均達到7cm以上。清除DPPH試驗中，其中以樟芝生長在12%香樟木屑水萃培養基中效果最佳，清除率為61%，其次為12%牛樟樹木屑培養基，清除率為60%以及3%與6%冇樟木屑培養基，清除率為52%。抗腫瘤細胞實驗中，抑制A549肺腺癌細胞以6%冇樟木屑水萃物培養基，抑制率60%為最佳，其次為3%香樟木屑水萃物培養基與12%牛樟樹木屑水萃物培養基，抑制率分別為58%與57%。抑制Hep G2肝母細胞癌以6%牛樟樹木屑水萃物培養基，抑制率73%為最佳，其次為12%與3%牛樟樹木屑水萃物培養基，抑制率分別為71%與68%。抑制Hep 3B肝癌細胞以3%牛樟樹木屑酒萃物培養基與12%牛樟樹木屑水萃物培養基為最佳，抑制率分別為63%與62%。細胞抗氧化能力測試，結果顯示出生長在3%、12牛樟樹木屑水萃物培養基與6%、12%香樟木屑水萃物培養基上的樟芝，其保護細胞能力具有顯著性差異(細胞存活率高於H2O2的存活率)。
　　研究結果顯示出，加入木屑萃取物其樟芝生長情形、清除DPPH能力、抗腫瘤試驗以及細胞抗氧化試驗，皆比單純PDA培養來的佳，其加入水萃取物其生長情形以及活性皆比加入酒萃取物來的佳。

　　Taiwanofungus camphoratus (synonym also known as Antrodia camphorata and Antrodia cinnamomea) is a famous medicinal mushroom, an endemic species in Taiwan, which is so far only grows in endemic host tree, Cinnamomum kanehirae. The fungus is belonging to Basidiomycota, Aphyllophorales, Polyporaceae. It is used for hepatoprotective, anti-cancer and anti-tumor effect in Taiwan, mainly active compounds are triterpenoids. This study aims on using other trees to instead of C. kanehirae for inoculating culture of Taiwanofungus camphoratus and the activities of their extracts. The preliminary study with three different sawdust extracts, i.e. C. kanehirae, C. micranthum and C. camphora, was added into the culture base medium. The anti-tumor activities of mycelial extracts are discussed.
　　Taiwanofungus camphoratus growing habits of preliminary observation woods extract added to the media, cultured for 30 days after the C. kanehirae, C. micranthum, 6% C. camphora, water extract medium growth to more than 7 cm, ethanol extract C. micranthum medium to reach more than 7 cm. DPPH assay which the growth of Taiwanofungus camphoratus the best results in 12% C. camphora water extract medium, scavenging ability was 61%, followed by 12% C. kanehirae water extract medium, scavenging ability was 60%, 3% and 6% C. camphora water extract medium, scavenging ability was 52%. The inhibition of tumor cell viability of 6% C. micranthum water extract medium on Human lung carcinoma (A549), inhibition rate of 60%, followed by 3% C. camphora water extract medium and 12% C. kanehirae water extract medium, inhibition rate of 58% and 57%. The 6% C. kanehirae water extract medium inhibition Human hepatoblastoma (Hep G2), inhibition rate of 73%, followed by 12% and 3% C. kanehirae water extract medium, inhibition rate of 71% and 68%. The 3% C. kanehirae ethanol extract medium and 12% C. kanehirae water extract medium inhibition Human hepatocellular carcinoma (Hep 3B), inhibition rate of 63% and 62%. Cell anti-inflammatory test the results show that growth at 3%, 12 C. kanehirae water extract medium and 6%, 12% C. camphora water extract medium of Taiwanofungus camphorates, Its ability to protect cells with significant differences (cell survival rate is higher than the survival rate of H2O2)
　　The results show woods extract added to the media of Taiwanofungus camphorates growth situation, DPPH assay, inhibition of tumor cell viability and Cell anti-inflammatory test are to the good than PDA medium culture, adding woods water extract the growth situation and activity, than to add the ethanol extract good.

中文摘要 …………………………………………………………………………… i
英文摘要………………………………………………………………………….. iii誌謝…………………………………………………………………………… v目次………………………………………………………………………………….. vi
圖目錄…………………………………………………………………………. ix 第一章 研究動機..…………………………………………………………………. 1
第二章 文獻回顧 …………………………………………………………………. 2
　　2.1　真菌簡介 ……………………………………………………………… 2
　　2.2　菇類介紹 ……………………………………………………………… 4
　　2.3　食藥用菇類生理活性 ………………………………………………… 6
　　2.4　樟芝介紹………………………………………………………………… 8
　　　　2.4.1　樟芝簡介 ………………………………………………………. 8
　　　　2.4.2　樟芝成分 …………………………………………………………. 9
　　　　2.4.3　樟芝生理活性 …………………………………………………... 10
　　　　2.4.4　樟芝栽培 ………………………………………………………. 11
第三章 材料與方法………………………………………………………………. 12
　　3.1　實驗材料與菌株……………………………………………………… 12
　　　　3.1.1　實驗菌株 ………………………………………………………. 12
　　　　3.1.2　實驗木屑 ………………………………………………………. 12
　　　　3.1.3　實驗細胞株 ……………………………………………………. 12
　　　　3.1.4　材料與藥品 ……………………………………………………. 13
　　　　3.1.5　實驗器材 ………………………………………………………. 14
　　3.2　實驗架構……………………………………………………………… 16
　　3.3　實驗方法……………………………………………………………… 17
　　　　3.3.1 牛樟芝菌種保存………………………………………………. 17
　　　　3.3.2 木屑培養基製備…………………………………………………. 17
　　　　3.3.3 菌種生長條件探討………………………………………………. 18
　　　　3.3.4 牛樟芝菌絲體萃取製備…………………………………………. 18
　　　　3.3.5 清除DPPH(1,1-diphenyl-2picryl hydrazyl)自由基能力…………. 19
　　　　3.3.6 細胞培養…………………………………………………………. 20
　　　　3.3.7 腫瘤細胞存活率分析( MTT assay) …………………………… 21
3.3.8細胞法抗氧化能力測試………………………………………….. 23
　　　　3.3.9 統計分析…………………………………………………………. 24
第四章 結果與討論………………………………………………………………. 25
　　4.1 樟芝生長條件探討 …………………………………………………… 25
　　　　4.1.1 熱水萃取較適生長………………………………………………. 25
　　　　4.1.2 超音波冷萃取較適生長…………………………………………. 25
　　4.2清除DPPH(1,1-diphenyl-2picryl hydrazyl)自由基能力測定 …………. 26
　　4.3腫瘤細胞存活率分析( MTT assay) …………………………………….. 27
　　　　4.3.1 培養於熱水萃取物培養基樟芝萃取液之抑制腫瘤細胞存活率分析 ……………………………………………………………………………... 27
　　　　4.3.2 培養於超音波冷萃取物培養基樟芝萃取液之抑制腫瘤細胞存活率分析 ………………………………………………………………………………. 28
　　4.4 細胞法抗氧化能力測試 ……………………………………………… 30
第五章 結論 ……………………………………………………………………. 32
第六章 參考文獻 ………………………………………………………………. 34










圖目錄
Fig.1 不同木屑熱水萃取物其培養基培養樟芝之生長情形…………………….. 40
Fig.2不同木屑超音波酒精萃取物其培養基培養樟芝之生長情形…………... 41
Fig.3 不同木屑熱水萃取液於稀釋4倍下清除DPPH自由基能力 …………… 42
Fig.4不同音波酒精萃取液於稀釋4倍下清除DPPH自由基能力…... 43
Fig.5 樟芝培養於不同木屑熱水萃取物其菌絲體萃取液於稀釋20倍下清除DPPH自由基能力………………………………………………………………………. 44
Fig.6 樟芝培養於不同木屑超音波酒精萃取物其菌絲體萃取液於稀釋20倍下清除DPPH自由基能力 …………………………………………………………… 45
Fig.7 不同木屑熱水萃取液於肺腺癌細胞(A549) 之存活率試 ………………. 46
木屑超
Fig.8 不同木屑超音波酒精萃取液於肺腺癌細胞(A549) 之存活率試驗 ……….. 47
Fig.9 樟芝培養於不同木屑熱水萃取物其菌絲體萃取液於肺腺癌細胞(A549) 之存活率試驗 …………………………………………………………………………. 48
Fig.10 樟芝培養於不同木屑超音波酒精萃取物其菌絲體萃取液於肺腺癌細胞(A549) 之存活率試驗…………………………………………………………… 49
Fig.11 不同木屑熱水萃取液於肝母細胞癌(Hep G2) 之存活率試驗………… 50
Fig.12 不同木屑超音波酒精萃取液於肝母細胞癌(Hep G2) 之存活率試驗…… 51
Fig.13 樟芝培養於不同木屑熱水萃取物其菌絲體萃取液於肝母細胞癌(Hep G2) 之存活率試驗 ………………………………………………………………………... 52
Fig.14 樟芝培養於不同木屑超音波酒精萃取物其菌絲體萃取液於肝母細胞癌(Hep G2) 之存活率試驗……………………………………………………………. 53
Fig.15 不同木屑熱水萃取液於肝癌細胞(Hep 3B) 之存活率試驗……………… 54
Fig.16 不同木屑超音波酒精萃取液於肝癌細胞(Hep 3B) 之存活率試驗……… 55
Fig.17 樟芝培養於不同木屑熱水萃取物其菌絲體萃取液於肝癌細胞(Hep 3B) 之存活率試驗 …………………………………………………………………………. 56
Fig.18 樟芝培養於不同木屑超音波酒精萃取物其菌絲體萃取液於肝癌細胞(Hep 3B) 之存活率試驗 ………………………………………………………………. 57
Fig.19 不同木屑熱水萃取液於細胞抗氧化試驗 ……………………………… 58
Fig.20 不同木屑超音波酒精萃取液於細胞抗氧化試驗 ……………………… 59
Fig.21 H2O2細胞毒殺作用曲線圖 ……………………………………………… 60
Fig.22 樟芝培養於不同木屑熱水萃取物其菌絲體萃取液於細胞抗氧化試驗 …. 61
Fig.23 樟芝培養於不同木屑超音波酒精萃取物其菌絲體萃取液於細胞抗氧化試驗 …………………………………………………………………………………….. 62
Fig.24 培養於CKH樟芝生長型態…………………………………………………..63
Fig.25 培養於CMH樟芝生長型態 …………………………………………. 64
Fig.26 培養於CCH樟芝生長型態……………………………………………… 65
Fig.27 培養於CKE樟芝生長型態……………………………………………… 66
Fig.28 培養於CME樟芝生長型態……………………………………………… 67
Fig.29 培養於CCE樟芝生長型態………………………………………………. 68

王伯徹、陳啟楨，常見食藥用菇介紹，食品工業發展研究所，1994。
王也珍，有趣的真菌，國立自然科學博物館，1995。
王伯徹，食藥用菇保健食品之開發，食品工業，2000，32(5):18-27。
王伯徹，綜論保健用菇之研發，食品工業，2002，34(5):1-2。
王培銘，食藥用菇液態培養製程之開發，食品工業，2002，34(5):31-35。
宋祖瑩，樟芝深層培養液抗氧化及抗腫瘤活性之研究，國立中興大學食品科學系博士論文，2003。
李雨薇，牛樟芝菌絲體發酵液對血管新生抑制作用及其機制之探討，長庚大學生化與生醫工程研究所碩士論文，2006。
李宛蓁，樟芝菌絲體培養與生理活性成分生成之研究，私立東海大學化化學工程研究所碩士論文，2003。
吳聲華、周文能、王也珍，台灣高等真菌-子囊菌與擔子菌的認識，國立自然科學博物館，1996。
林秀卿，食藥用菇類之呈味品質和抗氧化性質之評估，國立中興大學食品科學系碩士論文，1999。
吳德鵬，樟芝微量成分的研究，台灣師範大學化學研究所碩士論文，1995。
高曉薇，台灣靈芝屬新種樟芝之三帖類成分研究，台北醫學院天然物醫物研究所碩士論文，1992。
程一華，樟芝之成分研究，台灣師範大學化學研究所碩士論文，1994。
邵廣昭、彭鏡毅、吳文哲，台灣物種多樣性II.物種名錄，行政院農業委員會林務局出版，2008。
黃仁彰，菇類多醣體製劑的研發與應用，CCRC News ，2000，42:1-7。
黃玲娟，樟芝與姬松茸之抗氧化性質及多醣組成分析，國立中興大學食品科學系碩士論文，2000。
陳啟楨，金菇抗癌，元氣齋出版社，2006。
陳怡欣，牛樟芝發酵過濾液對大白鼠肝臟生理機能之影響，中國醫藥學院營養研究碩士論文，2002。
陳勁初、林文鑫、陳清農、許勝傑、黃仕政、陳炎鍊，台灣特有真菌-樟芝菌絲體之開發，中華真菌學會會刊，2001，16:7-22。
陳勁初，呂鋒洲，食療系列43，靈芝之王：台灣樟芝，元氣齋出版社，2001。
鄂征，組織培養和分子細胞學技術，九州圖書文物有限公司，2002。
葉怡真，巴西洋菇在醫學上的應用，食品工業，2005，37(5):17-26。
楊書威，藥樟菇活性成分研究，台灣大學藥學研究所碩士論文，1990。
蔡育真，固態發酵樟芝對小鼠免疫調節及抗腫瘤，南台科技大學生物科技系研究所碩士論文，2004。
劉業經，台灣重要樹木彩色圖治，國立中興大學台灣省林務局合作研究報告，1970。
劉國柱，現代科學看靈芝，雙利實驗有限公司，1990。
劉昌峰，探討不同培養基組成對光合菌Rhodobacter sphaeroidesg生產Coenzyme Q10之研究，中央大學化學工程學研究之碩士論文，2000。
謝翁維，菇類栽培之最近發展與展望，食品工業，2005，37(5):27-35。
簡秋源、姜宏哲、陳淑真，牛樟菇培養性狀及其三帖類成分分析之研究，林業叢刊第72號，1997。
Ala-Kokko L, Pihlajaniemi T, Myers JC, Kivirikko KI, Savolainen ER. Prevention and treatment of liver fibrosis based on pathogenesis.Alcohol Clin. Exp. Res. 1987. 23:944-949.
Cherng IH, Chiang HC. Three new triterpenoids from Antrodia cinnamomea. J Nat Prod. 1995. 58:1655-1661.
Cherng IH, Wu DP, Chiang HC. Triterpenoids from Antrodia cinnamomea. Phytochem. 1996. 41(1):263-267.
Chen CJ, Ching HS, Lan M H. Study on solid cultivation and bioactivity of Antrodia camphorate. Fungal Science. 2001. 16(1,2): 65-72.
Forage RG, Harrison DEF, Pitt DE. Effect of environment on microbial activity. Comprehensive Biotechnology. 1985. 1:253-279.
Hagiwara SY, Takahashi M, Shen Y, Kaihou S, Tomiyama T, Yazawa M, Tamai Y, Sin Y, Kazusaka A, Terazawa M. A phytochemical in the edible Tamogi-take mushroom (Pleurotus cornucopiae), D-mannitol, inhibits ACE activit and lowers the blood pressure of spontaneously hypertensive rats. Biosci Biotechnol Biochem. 2005. 69(8):1603-1605.
Hawksworth DL. Mushroom: the extent of the unexplored potential. Int. J. Med. Mushr. 2001. 3:333-337.
Hikino H, Ishiyama M, Suzuki Y and Konne C. Mechanisms of hypoglycemic activity of Ganoderma B: a glycan of Ganoderma lucidum fruit bodies. Planta Medica.1989. 55(5):423-428.
Hseu YC, Chen SC, Yech YJ, Wang L, Yang HL. Antioxidant activity of Antrodia camphorate on free radical-induced endothelial cell damage. J Ethnopharmacol. 2008.
Hsu YC, Chang WC, Hseu YT, Lee CY, Chen PC, Chen JY, Yang HL. Protection of oxidative damage by aqueous extract from Antrodia Camphorata mycelia in normal human erythrocytes. LIFE SCI. 2002. 71:469-482.
Ishikawa NK, Yamaji K, Tahara S, Fukushi Y, Takahashi K. Highly oxidized cuparene-type sesquiterpenes from a mycelial culture of Flammulina velutipes. Phytochemistry. 2000. 54(8):777-782.
Jacobson, E.S., Hove, E. and Emery, H.S. Antioxidant function of melanin in black fungi. INFECT IMMUN. 1995. 63: 4944-4945.
Kiho T, TsujimuraY, Sakushima M, Usui S. [Polysaccharides in fungi.XXXIII. Hypoglycemic activity of an acidic polysaccharide (AC) from Tremella fuciformis]. Yakugaku Zasshi. 1994. 114(5):308-315.
Kim HG, Shrestha B, Lim SY, Yoon DH, Chang WC, Shin DJ, Han SK, Park SM, Park JH, Park HI, Sung JM, Jang Y, Chung N, Hwang KC, Kim TW. Cordycepin inhibits lipopolysaccharide-induced inflammation by the suppression of NF-kappaB through Akt and p38 inhibition in RAW 264.7 macrophage cells. Eur J Pharmacol. 2006. 545(2-3):192-199.
Lull C, Wichers HJ, Savelkoul HF. Antiinflammatory and immunomodulating properties of fungal metabolites. Mediators Inflamm. 2005. (2):63-80.
Mau J L, Huang P N, Huang SJ, Chen CC. Antioxidant properties of methanolic extract from two kinds of Antrodia camphorate mycelia. Food Chem. 2004. 86: 25-31.
Mizuno T. Bioactive biomoleules of mushrooms:Food function and medicinal effect of mushroom fungi. Food Rev. 1995. Int.11:7-21.
Mizuno T, Kinoshita T, Zhuang C, Ito H, Mayuzumi Y. Antitumor-active heteroglycans from niohshimeji mushroom,Tricholoma giganteum. Biosci. Biotechnol. Biochem. 1995. 59:568-71.
Morigiwa A, Kitabatake K, Fujimoto Y, Ikekawa N. Angiotensin conventing enzyme-inhibitory triterpenes from Ganoderma lucidum. Chemical & Pharmaceutical Bulletin. 1986. 34: 3025-3028.
Osman E, Owen JS, Burroughs AK. Review article: S-adenosyl-L-methionine-a new therapeutic agent in liver disease. Aliment Pharmacol Ther. 1993. 7: 21-28.
Pandey A, Ashakumary L, Selvakumar P. Copra waste-a novel substrate for solid-state fermentation. Bioresource Technology. 1995. 51: 217-220.
Song TY, Yen GC. Antioxidant properties of Antrodia camphorata in submerged culture. J. Agric. Food Chem. 2002. 50: 3322-3327.
Ukai S, Kiho T, Haro C, Kuruma I, Tanaka Y. Anti-inflammatory effect of the polysaccharide from fruit bodies of several fungi. Journal of Pharmacobio-Dynamics. 1983. 6: 983-990.
Ye M, Liu JK, Lu ZX, Zhao Y, Liu SF, Li LL, Tan M, Weng XX, Li W, Cao Y. Grifolin, a potential antitumor natural product from the mushroom Albatrellus confluens, inhibits tumor cell growth by inducing apoptosis in vitro. FEBS Lett. 2005. 579(16):3437-3443.