臺灣博碩士論文加值系統

本研究主要目的，為探討以三角瓶液態培養，了解不同添加物及培養條件對於樟芝(Antrodia camphorata BCRC35396 )菌絲生長、抗氧化效果、DPPH自由基掃除活性及總多酚含量之影響。
實驗結果顯示：於250ml三角瓶中，以100ml培養液含玉米澱粉4.78%、YM Broth 3.19%在pH=5.54、25℃下，以轉速100rpm於恆溫培養箱培養14天，其中添加10%之乳化劑(tween85)菌體乾重達2.39g/100ml，是未添加的2倍左右，添加0.1% polypropylene glycol掃除DPPH自由基活性達39.93%，較未添加提高10%；添加5%葡萄籽油總多酚量可達27.9mg/g extract，是未添加添加的1.5倍，0.1%polypropylene glycol總多酚量可達68.9mg/g extract，是未添加的3倍。
而碳氮比愈低，菌絲生長情況愈好，在碳源濃度5%、碳氮比0.78:1下，菌絲乾重最高可達1.52g/100ml，是碳氮比50:1的2.5倍，且總多酚含量與掃除DPPH自由基活性有相關性。

The main purpose of this research was to study the effect of culture conditions on the mycelium production, the formation of antioxidant activity in submerged culture of Antrodia camphorata (BCRC35396).
Shaken-flask cultures were carried out in the medium containing 4.78% of corn starch, 3.19% of YM broth at 25℃, initial pH 5.54 and 100rpm. The supplementation of 10% tween 85 was found to be beneficial to the mycelium growth. The biomass concentration reached 2.39g/100ml, which was two folds higher than that of the control. With the addition of 0.1% polypropylene glycol, DPPH radical scavenging activity could rise to 39.93% and the amount of total polyphenol could reach 68.9(mg/g extract), which was 3 times higher then that of the control. Moreover, 5% of grape seed oil could cause a 1.5 time increase of the amount of total polyphenol.
The media with low C/N ratio was proved to be favorable to the mycelium growth and the biomass concentration could reach 1.52g/100ml at low C/N ratio of 0.78. Compared with shaken-flask cultures, surface cultures could lead to the increase of DPPH radical scavenging activity and antioxidant activity.

目 錄

誌 謝 .....................................................................Ⅰ
中文摘要 .................................................................... Ⅱ
英文摘要 .................................................................... Ⅲ
目 錄 .................................................................... Ⅳ
表 目 錄 .................................................................... Ⅵ
圖 目 錄 .................................................................... Ⅶ


第一章 緒論

1.1 研究動機與背景......................................... 1
1.2 研究目的....................................................... 2

第二章 文獻回顧

2.1 樟芝的介紹 ............................................................ 3
2.1.1 樟芝之命名...................................................... 3
2.1.2 樟芝之分類地位............................................... 3
2.1.3 樟芝之抗氧化效用及其生理活性試驗…...............4
4.2 脂肪酸添加及碳氮比對液態培養之影響.................... 4
2.2.1脂肪酸添加對液態培養之影響............................ 4
2.2.2碳氮比對液態培養之影響............................... 5
2.3 氧化與抗氧化作用…..................................................5
2.3.1脂質自氧化反應…...................................... 5
2.3.2抗氧化劑....…...................................... 7
2-4 多酚類化合物 ......................................................... 9
2.4.1多酚類之化學結構…….................................. 9
2.4.2 多酚類之分析方法......................................... 14
2.4.3 多酚類之功用............................................... 14

第三章 實驗材料與分析方法

3.1 菌株 .................................................................... 15
3.2 實驗藥品 ............................................................. 15
3.3 實驗儀器與設備 ................................................... 16
3.4 實驗方法 ............................................................. 17
3.4.1試管斜面培養…….. ........................... 17
3.4.2 培養皿平面培養............................................. 17
3.4.3 液態種菌培養 ...................................... 18
3.4.3探討添加物對樟芝菌絲生長及抗氧化活性生成之影
響……………………………………………………….18
3.4.5探討靜置及振盪方式之表面通氣交應對樟芝菌絲生成之影響……………………………………………18
3.4.6探討不同碳氮比對樟芝菌絲生長及抗氧化活性生成之影響………………………………………………..19
3.5分析方法………………………………………………………19
3.51 pH值測定………………………………………………19
3.5.2菌體濃度測定……………………………………………19
3.5.3 甲醇萃出物製備………………………………………19
3.5.4 掃除DPPH自由基活性測定………………………20
3.5.5 抗氧化活性測定………………………………………20
3.5.6 總多酚含量測定………………………………………20

第四章 結果與討論

4.1 不同添加物添加物對樟芝菌絲生長及抗氧化活性生成之影響…………………………………………………………22
4.1.1 添加橄欖油................................................. 22
4.1.2 添加葡萄籽油.......................................... 25
4.1.3 添加花生油............................................... 28
4.1.4 添加沙拉油...................................... 31
4.1.5 添加乳化劑Tween20................................... 34
4.1.6 添加乳化劑Tween85................................... 37
4.1.7 添加polypropylene glycol……....................... 40
4.2探討表面通氣效應對樟芝菌絲生長及抗氧化活性生成之影響……………………………………………………………... 43
4.3探討不同碳氮比對樟芝菌生及抗氧化活性生成之影響. 49
4.3.1 碳源濃度5%………………………………………..51
4.3.2 碳源濃度3%……………………………………………53
4.3.3 碳源濃度 1%…………………………………………55

第五章 結論與展望

5-1 結論 ........................................................... 57
5-2 未來展望…............................................. 57

參考文獻 ………………………………………………………………………………………59








表目錄

Table.1-1 樟芝成分中具有藥性之物質……………............. 1
Table.2-1 polyphonels in foods………………............. 12
Table.3-1 實驗藥品 .................................................. 15
Table.3-2 實驗儀器與設備 ........................................ 16























圖目錄

Fig.2.1 樟芝子實體......................................... 3
Fig.2.2常用之人工合成抗氧化劑............................. 8
Fig.2.3人體內之自由基與氧化反應與疾病生成之關係…….9
Fig.2.4 Chemical structures of polyphenols...................... 10
Fig.2.5 Chemical structures of polyphenols.................... 11
Fig.2.6 類黃酮的基本結構…..………………………….......... 13
Fig.2.7各種花青素的結構….…….…….............................. 14
Fig3.1多酚檢量線……….………………………………………21
Fig 4.1添加橄欖油樟芝菌絲生長情況……………….…..…….22
Fig 4.2添加橄欖油對樟芝菌絲生長及發酵液pH值之影響及菌絲體甲醇萃出率之影響……………………………...... 23
Fig 4.3添加橄欖油對樟芝抗氧化、掃除DPPH活性、總多酚含量….……………………………………………………. 24
Fig 4.4添加葡萄籽油樟芝菌絲生長情況……………………...25
Fig 4.5添加葡萄籽油對樟芝菌絲生長及發酵液pH值及菌絲體甲醇萃出率之影響………….………………..……….….26
Fig 4.6添加葡萄籽油對樟芝抗氧化、掃除DPPH活性、總多酚含量之影響…………….………………….………….. 27
Fig 4.7添加花生油樟芝菌絲生長情況...…………….…………28
Fig 4.8添加花生油對樟芝菌絲生長及發酵液pH值及菌絲體甲醇萃出率之影響………….…..………………………..29
Fig 4.9添加花生油對樟芝抗氧化、掃除DPPH活性、總多酚含量之影響………………………………….…... 30
Fig 4.10添加沙拉油樟芝菌絲生長情………………...…..…….31
Fig 4.11 添加沙拉油對樟芝菌絲生長及發酵液pH值及菌絲體甲醇萃出率之影響…………….……………………. 32
Fig 4.12添加沙拉油對樟芝抗氧化、掃除DPPH活性、總多酚含量之影響…….………………………………………33
Fig 4.13添加tween20樟芝菌絲生長情況………………..…….34
Fig4.14添加tween20對樟芝菌絲生長及發酵液pH值及菌絲 體甲醇萃出率之影響…………………….……………. 35
Fig 4.15添加tween20對樟芝抗氧化、掃除DPPH活性、總多酚含量之影響……………………………………….……36
Fig 4.16添加tween20樟芝菌絲生長情況……………...…….37
Fig 4.17添加tween85對樟芝菌絲生長及發酵液pH值及菌絲體甲醇萃出率之影響……….................... 38
Fig 4.18 添加tween85對樟芝抗氧化、掃除DPPH活性、總多酚含量之影響………………………….…………….... 39
Fig 4.19添加tween20樟芝菌絲生長情況………….…..…….40
Fig 4.20 添加ppg對樟芝菌絲生長及發酵液pH值之影響及菌絲體甲醇萃出率之影響..…………….......…....…... 41
Fig 4.21 添加ppg對樟芝抗氧化、掃除DPPH活性、總多酚含量之影響…………………………………………….... 42
Fig 4.22表面通氣樟芝菌絲生長情況(I)…………..……………43
Fig 4.23表面通氣樟芝菌絲生長情況(II)…………………….…44
Fig 4.24表面通氣試驗對樟芝菌絲生長及發酵液pH值及菌絲體之影響(I)………………………………………....…45
Fig 4.25表面通氣試驗對樟芝抗氧化、掃除DPPH活性、總多酚含量及菌絲體甲醇萃出率之影響(I)…………………………………………………………..46
Fig 4.26表面通氣試驗對樟芝菌絲生長及發酵液pH值之影響(II)……………………….…………….………………...47
Fig 4.27表面通氣試驗對樟芝抗氧化、掃除DPPH活性、總多酚含量及菌絲體甲醇萃出率之影響(II)………………………………………..…………...... 48
Fig4.28碳源濃度1%之C/N ratio樟芝菌絲生長情況…………49
Fig 4.29碳源濃度5%之C/N ratio對樟芝菌絲生長及發酵液pH值及甲醇萃出率之影響……...…………………........ 51
Fig 4.30碳源濃度5%之C/N ratio對樟芝抗氧化、掃除D..PPH活性、總多酚含量之影響…………………………..…. 52
Fig 4.31碳源濃度3%之C/N ratio對樟芝菌絲生長及發酵液pH值與甲醇萃出液之影響…………………………….......53
Fig 4.32碳源濃度3%之C/N ratio對樟芝抗氧化、掃除DPPH活性、總多酚含量之影響..……………………………..54
Fig 4.33碳源濃度1%之C/N ratio對樟芝菌絲生長及發酵液pH值之影響………………………………………………55
Fig 4.33碳源濃度1%之C/N ratio對樟芝抗氧化、掃除DPPH活性、總多酚含量之影響………………………………56

參考文獻
(1) 程一華，”樟芝之成份研究”，台灣師範大學化學研究所，碩士論文，台北，台灣，1994。
(2) 黃鈴娟，”樟芝與姬松茸之抗氧化性質及其多醣組成”，中興大學食品科學研究所，碩士論文，台中，台灣，2000。
(3) 李宛蓁，”培養條件對樟芝菌絲培養與生理活性成份之研究”，東海大學化學工程學研究所，碩士論文，台中，台灣，2003。
(4) 高曉薇，”台灣靈芝屬新種樟芝之三帖類成分研究”，台灣醫學院天然物醫學研究所碩士論文，1991
(5) 程一華，”樟芝之成分研究”，台灣師範大學化學研究所碩士論文，1994
(6) 蔡雁暉，”樟芝深層培養液及其多醣體之抗氧化特性”，國立中興大學食品科學系碩士論文，2002
(7) 郭淑卿，”樟芝發酵液對大鼠肝臟纖維化及胃腸功能之改善作用”，中國醫藥學院中國藥學研究所碩士論文，2002
(8) 葉怡真，”樟芝對血管內皮細胞之影響及保心血管疾病之機制探討”，中國醫藥學院營養研究所碩士論文，2002
(9) 陳欣怡，”牛樟芝發酵過濾液對大白鼠肝臟生理機能之影響”，中國醫藥學院營養研究所碩士論文，2002
(10)吳德鵬，”樟芝微量成分的研究”，台灣師範大學化學研究所碩士論文，1995
(11) 臧穆、蘇慶華，”我國台灣產靈芝屬新種樟芝”，雲南植物研究，12，395-396，1990
(12) 王伯徹、黃仁彰，”靈芝與樟芝之研究與市場面面觀”，食品工業，34(5)：3-17，2002
(13) 張益軒，”牛樟芝分子生物鑑定系統之研究”，國立台灣大學農業化學研究所碩士論文，2001
(14) 嚴貴榮，”樟芝對STZ誘發高血糖鼠血糖調節與抗氧化之影響”，輔仁大學食品營養學系碩士論文，2002
(15) 劉翠玲，”樟芝對倉鼠體內脂質代謝與抗氧化狀態之影響”，輔仁大學食品營養學系碩士論文，2002
(16) 黃家梁，”液態培養靈芝菌絲體與靈芝多醣最適化之研究”，東海大學化工研究所碩士論文，1996
(17) Stasinopoulos, S. J., Seviour, R. J., ”Stimulation of exopolysacchavide production in the fungus Acremonium persicinum with fatty acids.” Biotechnol. Bioeng. 36:778-782., 1990
(18) Stejskal, J. and Potucek, F., ”Oxygen transfer in liquids.” Biotechnol. Bioeng. 27:503-508., 1985
(19) Litchfield, J. H., ”Production of single cell protein for use in food and feed”. In: Microbial Technology, 2nd ed. (Peppier, H.J.and Perlman, D., eds):93~145, Academic Press, New York., 1979
(20) 王青牡、孫姝媛， ”我國液體培養藥用虫草菌絲體的研究進展”，食用菌，19(3):2-4，1997
(21) 楊芳鏘，”氣舉式生化反應器在靈芝液態培養之應用”，行政院國家科學委員會專題研究計畫成果報告NSC85-2214-E029-004，1996
(22) 韓紹英、趙傳孝、姜彥祥、龔國華，”食用菌高產栽培及科學加工”中國食品出版社，北京，1989
(23) 劉昌峰，”探討不同培養基組成對光合菌Rhodobacter sphaeroides生
產Coenzyme Q10之研究”中央大學化學工程學研究所碩士論文，2000。
(24) Kubow, S. ”Toxicity of dietary lipid peroxidation products”. Tren. Food Sci.Tech. 1: 677-770., 1990
(25) Mineetti M., C. Mallozzi, G. Scorza, and MD. Scott. ”Role of oxygen and carbo radicals in hemoglobin oxidation.” Arch. Biochem. Biophys. 302: 233-243. 1993.
(26) 張為憲，”高等食品化學”，華香園出版社，台北，台灣，1995
(27) Fennema O.R. , ”Lipids” , Food Chemistry , 1996, Marcel Dekker, Inc.
(28) Giese B. , ”Antioxidant: tools for preventing lipid oxidant” , Food Technology , 50(11) , 73-81 , 1996
(29) Cherng, I.H.,Wu, D.P. and Chiang, H.C. ”Triterpenoids from Antrodia cinnamomea” , Phytochemistry , 41(1) ,263-267 , 1996
(30) Claudine, M., Augustin, S., Christine, M., ”Polyphenols: food sources and bioavailability1,2”, Am. J. Clin. Nutr., 79( 5), 727-747, 2004
(31) Rice-Evans, C. A. & Miller, N. J., ”Antioxidant activities of flavonoids as bioactive components of food.”, Biochem. Soc. Trans. 24: 790-795, 1996
(32) Hollman,P. C. H., Katan, M. G., ”Analysis and health effects of flavonoids.” Food Chemistry 57: 43-46, 1996
(33) E.N. Frankel, , J. Kanner, J.B. German, E. Parks and J.E. Kinsella,
”Inhibition of oxidation of human low-density lipoprotein by phenolic substances in red win.”, The Lancet 341: 454-457, 1993
(34) Bravo L., ”Polyphenols: chemistry, dietary sources, metabolism, and nutritional significance.” Nutr. Rev. 56:317-333, 1998
(35) Cook, J.D., Reddy, M.B. and Hurrell, ”The effect of red and white wines on nonheme iron absorption in humans.” Am. J. Clin. Nutr., 61: 800-804, 1995
(36) 黃惠琴，”樟芝菌絲體深層培養之研究”，東海大學化工研究所碩士論文，2001
(37) Bondet, V.; Brand-Williams, W.; Berset, C. ”Kinetics and mechanisms of antioxidant activity using the DPPH free radical method. ” Food Sci. Technol.-Leb., 30 (6), 609-615, 1997
(38) Osawa, T., & Namiki.”A novel type of antioxidant isolated from leaf wax of Eucalyptus leaves” Agric. Biol. Chem. 45, 735-739, 1981
(39) 莊曉莉、李祥麟、黃檀溪，”蜸蛹蟲草貝有顯著之抗氧化性興自由基清除能力”，師大學報：數理與科技類，48(1,2)，13-24，2003
(40) Brand-Williams,W., Cuvelier, M.E. and Berset,C. ” Use of free radical method to evaluate antioxidant activity. ” Lebensm. Wiss. Technol. 28: 25-30, 1995