臺灣博碩士論文加值系統

樟芝只寄生在牛樟樹腐朽的樹幹內，樟芝是台灣民間經常應用的中草藥，含有三類、胺基酸、蛋白質、糖類和多醣體。
本研究包括：(1)測量樟芝多糖體之單醣組成，(2)不同含糖培養基對樟芝醣類化合物合成之影響，(3)利用high-performance anion-exchange Chromatography(HPAEC)對於五種樟芝的多醣作定性分析，(4)以B型肝炎病毒產生的MS-G2 cell Line研究五種樟芝多醣體對抗B型肝炎病毒的作用。
本研究的結論為：(1)添加40g/L濃度的葡萄糖和半乳糖，樟芝生長速度均有明顯的增加，且最快速。添加10-80g/L濃度的鼠李糖、木糖、麥芽糖，對樟芝生長速度無明顯之影響。分析培養60天的樟芝菌絲體，添加葡萄糖可以增加阿拉伯糖和葡萄糖的量，添加蔗糖則提高木蜜醇的合成，添加鼠李糖可以提高鼠李糖在細胞中的合成，添加半乳糖可以提高肌醇和葡萄糖的量，木糖則降低葡萄糖和木蜜醇的合成。(2)樟芝子實體和培養的菌絲體之多糖體不同，分析培養26天的樟芝菌絲體，有中性糖，半乳糖，葡萄糖，甘露醇，半乳糖胺。(3)所有的樟芝菌絲多醣體均有抗B型肝炎抗毒的活性，其中B86在50μg/ml有強烈抑制B型肝炎病毒表面抗原的作用，而且比1000單位/ml的α-干擾素還有效，只有B86及35398兩種有對抗B型肝炎病毒核心抗原的活性，所有樟芝菌絲體均無細胞毒性。
本研究中，五種樟芝菌絲體中的B86表現出優良的抗B型肝炎作用，其生物效能及活體實驗，值得再繼續研究。

目 錄
目 錄-----------------------------------------------------------------------Ⅰ
圖表目錄-------------------------------------------------------------------Ⅲ
中文摘要-----------------------------------------------------------------------Ⅴ
英文摘要-----------------------------------------------------------------------Ⅶ
第一章 緒 論---------------------------------------------------------------1
第二章 總 論----------------------------------------------------------------------5
第一節 靈芝之文獻考察---------------------------------------------7
一、靈芝之本草文獻考察--------------------------------------7
二、靈芝之藥用植物及生藥學文獻考察-----------------------25
三、靈芝之成分文獻考察---------------------------------------------27
四、樟芝之文獻考察---------------------------------------------------28
五、樟芝之藥理作用文獻考察---------------------------------------33
第二節 乙型肝炎病毒-----------------------------------------------------37
一、乙型肝炎病毒之構造及其感染性----------------------------37
二、乙型肝炎病毒轉錄(transcription)及訊息RNA------------38
三、乙型肝炎病毒之轉譯(translation)及其抗原(antigen) ----39
四、乙型肝炎病毒之生活史(life cycle) --------------------------40
第三章 材料與方法--------------------------------------------------------------42
第一節 實驗材料-----------------------------------------------------------42
一、實驗材料------------------------------------------------------------42
二、實驗藥品------------------------------------------------------------44
三、實驗儀器------------------------------------------------------------45
第二節 實驗方法-----------------------------------------------------------46
一、樟芝粗蛋白之測量------------------------------------------------46
二、不同含醣培養基對樟芝糖類合成之影響--------------------46
三、相同培養條件下不同種樟芝多糖之測量--------------------47
四、抗乙型肝炎病毒活性之測定------------------------------------48
第四章 實驗結果-----------------------------------------------------------------50
一、樟芝粗蛋白之測量-----------------------------------------------50
二、不同含醣培養基對樟芝醣類合成之影響--------------------51
三、相同培養條件下不同種樟芝多醣之測量--------------------72
四、抗乙型肝炎病毒活性之測定------------------------------------75
第五章 討 論-----------------------------------------------------------------------79
第六章 結 論-----------------------------------------------------------------------82
謝 辭--------------------------------------------------------------------------------84
參考文獻-----------------------------------------------------------------------------85

1. 陳介甫:從自然涵養觀念談中藥及天然物的研究。科學月刊1989;20(6)：413-418。
2. Holmstedt B. & G. Liljestrand (Eds.), Readings in Pharmacology, Pergamon Press Ltd., The Macmillan Co. New York, 1963, pp:1-2.
3. 孔憲鐸：中藥現代化。科學農業2000;48(3,4)：90-97。
4. 陳介甫：植物組織培養及藥物動力學之重要性。國立中國醫藥研究所研究成果發表會論文集，2002;pp52-54。
5. Cherng IW, Wu DP, Chiang HC. Triterpenoids from Antrodia cinnamomea. Phytochem 1996;41: 263-267
6. Yang SW, Shen YC, Chen CH. Steroids and triterpenoids of Antrodia cinnamomea- a fungus parasitic on Cinnamomum micranthum. Phytochem 1996;41: 1389-1392.
7. Chiang HC, Wu DP, Cherng IW, Ueng CH. A sesquiterpene lactone, phenyl and biphenyl compounds from Antrodia cinnamomea. Phytochem 1995;39: 613-616.
8. Chen CH, Yang SW. New steroid acids from Antrodia cinnamomea, a fungal parasite of Cinnamomum micranthum. J Nat Products 1995;58: 1655-1661.
9. Wu SH, Ryvarden L, Chang TT. Antrodia camphorata (‘niu-chang-chih’), new combination of a medicinal fungus in Taiwan. Bot Bull Acad Sin 1997;38:273-275.
10. 蔡宗統、廖淑女：靈芝之採集、栽培與利用，參雲出版社，台中，1992;pp37-74。
11. 謝文全重輯，神農本草經（古今功能輯注本），中國藥學研究所，台中1995。
12. 那琦、謝文全重輯：重輯名醫別錄，中國藥學研究所，台中，1997;pp25-26
13. 陶弘景校注、小山島尚真、森立之重輯、岡西為人訂補解題，本草經集注，南大阪印刷株式會社，日本1972;pp36-37。
14. 謝文全、李妍槿重輯，重輯重廣英公本草，中國藥學研究所，台中，2000;pp74-75。
15. 謝文全、林豐定重輯，重輯開寶重定本草，中國藥學研究所，台中，1998。
16. 謝文全、黃耀聰重輯：經史證類備急本草，中國藥學研究所，台中，2002。
17. 宋唐慎徽撰，張存惠重刊，那琦解題并序，魏德文索引并刊：重修政和經史証類備用本草，南天書局有限公司，台北，1976;pp168。
18. 明劉文泰等奉敕撰：御製本草品彙精要（弘治原本影縮版），台灣寶樹銀同藏書，苗栗，1988;pp276-280。
19. 明•李時珍著，圖解本草綱目（下），文光圖書公司印行，台北，1970;pp1990。
20. 明•陳嘉謨撰，王淑民等點校，本草蒙筌卷之八，人民衛生出版社，北京，1988。
21. 吳其濬撰、楊家駱主編：植物名實圖考長編上，世界書局印行，台北，1981;pp182-185。
22. 陸費逵總勘，抱朴子內篇內十一，台灣中華書局，台北，1968;pp2-5。
23. 臧勵龢編：中國古今地名大辭典，台灣商務印書館，台北，1975;pp4-820。
24. 甘偉忪著：藥用植物學，國立中國醫藥研究所，台北，2001;pp88-89。
25. 汪昭武：拉漢藥用植物名稱和檢索手冊，中國醫藥科技出版社，北京，1990;pp573-575。
26. 陳德昌等：中國中藥材真偽鑑別圖典I，廣東科技出版社，廣東，1995;pp238-240。
27. 中華本草編委會：中華本草精選本上冊，上海科學技術出版社，上海，1999;pp169-179。
28. 編委會：中藥大辭典，商務印書館，香港，1978;pp1180-1182。
29. Hiroi J. Ohara K. Kobayashi K. Fujii T. Effects of FR50948, a new orally active antiallergic agent, in experiment allergic models. Japanese Journal Pharmacology, 1998;46(4):337-348.
30. 高小薇：台灣靈芝新種靈芝之三類成分研究。台北醫學院天然藥物醫學研究所 碩士論文。
31. 廖英明：菇類中的許不了─樟芝。農業世界雜誌 1998;176：76-79。
32. Zang, M. & Q. Su, Ganoderma camphoratum, a new taxon in genus Ganoderma from Taiwan, China. Acta Bot. Yunnanica. 1990;12:395-396.
33. Chang, T.T. & W.N. Chou, Antrodia cinnamomea sp. Nov. on Cinnmomum Kamehirai in Taiwan. Mycol. Res. 1995;99:756-758.
34. Wu, S.H., R. Leif & T.T. Chang, Antrodia camphorata ( “niu-chang-chih” ), new combination of a medicinal fungus in Taiwan. Bot. Bull. Acad. Sin. 1997;38:273-275.
35. 黃鈴娟：牛樟芝與姬松茸之抗氧化性質及其多醣組成分析。中與大學食品科學系 碩士論文 民國八十九。
36. Cherng, I.H. & H.C. Chiang, Three new triterpenoids from Antrodia Cinnamomea, Journal of Natural Products. 1995;58:1655-1661.
37. Lieber CS. Prevention and treatment of liver fibrosis based on pathogenesis. Alcohol Clin Exp Res. 1999 May;23(5):944-9. Review.
38. Osman E, Owen JS, Burroughs AK. Review article: S-adenosyl-L-methionine--a new therapeutic agent in liver disease? Aliment Pharmacol Ther. 1993 Feb;7(1):21-8. Review.
39. Mato JM, Camara J, Fernandez de Paz J, Caballeria L, Coll S, Caballero A, Garcia-Buey L, Beltran J, Benita V, Caballeria J, Sola R, Moreno-Otero R, Barrao F, Martin-Duce A, Correa JA, Pares A, Barrao E, Garcia-Magaz I, Puerta JL, Moreno J, Boissard G, Ortiz P, Rodes J. S-adenosylmethionine in alcoholic liver cirrhosis: a randomized, placebo-controlled, double-blind, multicenter clinical trial. J Hepatol. 1999 Jun;30(6):1081-9.
40. Hsu, Y.C., W.C. Chang, Y.T. Hseu, C.Y. Lee, P.C. Chen, J.Y. Chen & H.L. Yang, Protection of oxidative damage by aqueous extract from Antrodia Camphorata mycelia in normal human erythrocytes. Life Sciences 2002;71:469-482.
41. Ala-Kokko L, Pihlajaniemi T, Myers JC, Kivirikko KI, Savolainen ER. Gene expression of type I, III and IV collagens in hepatic fibrosis induced by dimethylnitrosamine in the rat. Biochem J. 1987 May 15;244(1):75-9.
42. Ryhanen L, Stenback F, Ala-Kokko L, Savolainen ER. The effect of malotilate on type III and type IV collagen, laminin and fibronectin metabolism in dimethylnitrosamine-induced liver fibrosis in the rat. J Hepatol. 1996 Feb;24(2):238-45.
43. Mizuno T, Kinoshita T, Zhuang C, Ito H, Mayuzumi Y. Antitumor-active heteroglycans from niohshimeji mushroom, Tricholoma giganteum. Biosci Biotechnol Biochem. 1995 Apr;59(4):568-71.
44. Huang L.C., S.J. Huang, C.C. Chen & J.L. Mau. Antioxidant properties of Antrodia camphorata. 3rd International conference on Mushroom Biology and Mushroom Product & AMGA’s 26th National Mushroom Industry conference, 1999 Oct. 12-16, Sydeny, Australia.
45. Song, T.Y. & Yen, G.C. Antioxidant properties of Antrodia camphorata in submerged culture. J. Agri. Food Chem. 2002;50:3322-3327.
46. 楊書威：中藥樟菇活性成分之研究。台灣大學藥學研究所 碩士論文 民國八十年。
47. Chen, C.H., S.W. Yang, & Y.C. Shen, New steroid acids from antrodia cinnamomea, a fungal parasite of Cinnamomum micranthum. J. Nat. Prod. 1995;58:1655-1661.
48. Cherng, I.H. & H.C. Chiang, Three new triterpenoids from Antrodia cinnamomea. J. Natural Products 1995;58:365-371.
49. 陳勁初、林文鑫、陳清農、許勝傑、黃仕政、陳炎鍊。.台灣特有真菌-樟芝菌絲體之開發。中華真菌學會會刊。2001;16 (1,2)：7-22。
50. 黃坤正、丁懷謙、余俊強、何漣漪。基因毒理與動物病理組織之系統分析，依「食品新興製造系統整合及關鍵技術發四年計劃(第四年度)」2000計劃標號：007051-04:3-12。
51. 許勝傑、鍾煒惠、陳勁初、蔡明憲、王聖耀、蔡慶龍、陳巧文。大白鼠口服高劑量樟芝菌絲體之急性毒性試驗。2001中華保健食品學會第二屆第一次會員大會。
52. 陳清農、林文鑫、盛莉莎、黃仕政、陳勁初、劉宗榮。樟芝對Sprague-Dawley大白鼠之連續投藥口服急性毒性。2001中華保健食品學會第二屆第一次會員大會。
53. 林金鑫、曾虹萍、陳勁初、蔡明憲、楊明芬、陳巧文。大鼠致畸測一樟芝發酵原液凍乾成品。2001中華保健食品學會第二屆第一次會員大會。
54. Robinson, W. S., D. A. Clayton, and R. L. Greenman. DNA of a human hepatitis B virus candidate. J. Virol. 1974;14: 384-391.
55. Robinson, W. S. The genome of hepatitis B virus. Ann. Rev. Microbiol. 1977；31: 357-377.
56. Delius, H., N. M. Gough, C. H. Cameron, and K. Murray. Structure of the hepatitis B virus genome. J. Virol. 1983;47: 337-343.
57. Almeida, J. D., D. Rubenstein, and E.J. Stott. New antigen-antibody system in Australia-antigen-positive hepatitis. Lancet 1971;2:1225-1227.
58. Onodera, S., H. Ohori, M. Yamaki, and N. Ishida. Electron microscopy of human hepatits B virus core by negative staining-carbon film technique. J. Med. Virol. 1982;10: 147-155.
59. Gerlish, W. H., and W. S. Robinson. Hepatitis B virus contains protein attached to the 5’ terminus of its complete DAN strand. Cell 1980;21: 801-809.
60. Kaplan, P. M., R. L. Greenman, J. L. Gerin, R. H. Purcell, and W. S. Robinson. DNA polymerase associated with human hepatitis B antigen. J. Virol. 1973;12: 995-1005.
61. Blumberg, B.S., H.J. Alter, and S. Visnich. A “new” antigen in leukemia sear. J.A.M.A. 1965;191: 541-546.
62. Dane, D. S., C.H. Cameron, and M. Briggs. Virus-like particles in serum of patients with Australia-antigen-associated hepatitis. Lancet 1970;1: 695-698.
63. Bayer M.E., B.S. Blumberg, and B. Werner. Particles associated with Australia antigen in the sera of patients with leukemia, Down’s syndrome and hepatitis. Nature 1968;218: 1057-1059.
64. Beasley, R.P., L.-Y. Hwang, C.-C. Lin, and C.-S. Chien. Hepatocellular carcinoma and hepatitis B virus. A prospective study of 22, 707 men in Taiwan. Lancet 1980;2: 1129-1133.
65. Szmuness, W. Hepatocellular carcinoma and hepatitis B virus: evidence for a causal association. Prog. Med. Virol. 1978;24: 273-275.
66. Beasley, R.P., and L.-Y. Hwang. Epidemiology of hepatocellular carcinoma. In Vyas, G.N. (ed): Viral Hepatitis and Liver Disease. Grune & Stratton, New York 1984;pp209-224.
67. Cattaneo, R., H. Will and H. Schaller. Hepatitis B virus transcription in the infected liver. EMBO J. 1984;3: 2191-2196
68. Cattaneo, R., H. Will, N. Hernandez, and H. Schaller. Signals regulating hepatitis B surface antigen transcription. Nature (London) 1983;305: 336-338.
69. Standring, D. N., W. J. Rutter, H. E. Varmus, and D. Ganem. Transcription of the hepatitis B surface antigen gene in cultured murine cells initiates within the presurface region. J. Virol. 1984;50: 563-571.
70. Rall, L. B., D. N. Standring, O. Laub, and W. J. Rutter. Transcription of hepatitis B virus by RNA polymerase II. Mol. Cell. Biol. 1983;3: 1766-1773.
71. Pasek, M., T. Goto, W. Gillberg, B. Zink, H. Schaller, P. Mackay, G. Leadbetter, and K. Murray. Hepatitis B virus genes and their expression in E. coli. Nature 1979;282: 575-579.
72. Peterson, D. L., I. M. Roberts, and B. N. Vyas. Partial amino acid sequence of two major component polypeptides of hepatitis B surface antigen. Proc. Natl. Acad Sci. USA 1977;74: 1530-1534.
73. Mishiro, S., M. Imai, K. Takahashi, A. Machida, T. Gotanda, Y. Miyakawa, and M. Mayumi. A 49,000-dalton polypeptide bearing all antigenic determinants and full immunogenicity of 22-nm hepatitis B surface antigen particles. J. Immunol. 1980;124: 1589-1593.
74. Stibbe, W., and W. H. Gerlich. Structural relationships between minor and major proteins of hepatitis B surface antigen. J. Virol. 1983;46: 626-670.
75. Heermann, K. H., U. Goldmann, W. Schwartz, T. Seyffarth, H. Baumgarten, and W. H. Gerlich. Large surface proteins of hepatitis B virus containing the pre-S sequence. J. Virol. 1984;52: 396-402.
76. Stibbe, W., and W. H. Gerlich. Variable protein composition of hepatitis B surface antigen from different donors. Virology 1982;123: 436-442.
77. Neurath A. R., S. B. H. Kent, N. Strick, et al. Identification and chemical synthesis of a host receptor binding site on hepatitis B virus. Cell 1986;46: 429-436.
78. Iwarson, S., E. Tabor, H. C. Thomasf, et al. Nutralization of hepatitis B virus infectivity by a murine monoclonal antibody: an experimental study in the chimpanzee. J. Med. Virol. 1985;16: 89-96.
79. Salfeld, J., E. Pfaff, M. Noarl, and H. Schaller. Antigenic determinants and functional domains in core antigen and e antigen from hepatitis B virus. J. Virol. 1989;63: 789-792.
80. Garcia, P. D., J.-H. Ou, W. J. Rutter, and P. Walter. Targeting of the hepatitis B virus precore protein to the endoplasmic reticulum membrane and the product released into the cytoplasm. J. Cell Biol. 1988;106: 1093-1104.
81. OU, J.-H. D. H. Standring, F. R. Masiarze, and W. J. Rutter. A signal peptide encoded within the precore region of hepatitis B virus directs the secretion of a heterogeneous population of antigen in Xenopus oocytes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988;85: 8405-8409.
82. Bruss, V., and W.H. Gerlich. Formation of transmembraneous hepatitis B antigen by cotranslational in vitro processing of the viral precore protein. Virology 1988;163: 268-275.
83. Chang TT, Chou WN. Antrodia cinnamomea sp. Nov. on Cinnamomum kanehirai in Taiwan. Mycol Res 1995;99:756-758.
84. Wang HL, Lee PD, Liu LF, Su JC. Effect of sorbitol induced osmotic stress on the changes of carbohydrate and free Sugar Flux in Antrodia Camphorata 30 amino acid pools in sweet potato cell suspension cultures. Botanical Bulletin of Academia Sinica 1999;40: 219-225.
85. Sureau C, Romet-Lemonne JL, Mullins JI, Essex M. Production of hepatitis B virus by a differentiated human hepatoma cell line after transfection with cloned circular HBV DNA. Cell. 1986 Oct 10;47(1):37-47.
86. Acs G, Sells MA, Purcell RH, Price P, Engle R, Shapiro M, Popper H. Hepatitis B virus produced by transfected Hep G2 cells causes hepatitis in chimpanzees. Proc Natl Acad Sci U S A. 1987 Jul;84(13):4641-4644.
87. Tsurimoto T, Fujiyama A, Matsubara K. Stable expression and replication of hepatitis B virus genome in an integrated state in a human hepatoma cell line transfected with the cloned viral DNA. Proc Natl Acad Sci U S A. 1987 Jan;84(2):444-448.
88. Imazeki F, Yaginuma K, Omata M, Okuda K, Kobayashi M, Koike K. RNA transcripts of hepatitis B virus in hepatocellular carcinoma. Hepatology. 1987 Jul-Aug;7(4):753-757.
89. 張益軒：牛樟芝分子生物鑑定系統之研究。國立台灣大學農業化學研究所 碩士論文 民國九十一年。