臺灣博碩士論文加值系統

牛樟芝為台灣是特有真菌，別稱為樟芝或牛樟菇。牛樟芝的主要的生理活性成分為三萜類，據相關報導指出三萜類有各種生理活性，包括了具有抗癌和抗發炎的潛力。三萜類化合物是牛樟芝萃取物中苦味成份的來源。其中牛樟芝三萜類依相關報導中主要包括了麥角甾烷(Ergostane)和羊毛甾烷(Lanostane)兩大類，然而牛樟芝中活性化合物的含量與種類取決於收穫的時間、萃取方式及培養條件；因此，如何檢測牛樟芝活性成分與含量是很重要的事。為了評估牛樟芝的三萜類的分子量，在這項的研究中，我們針對牛樟芝內Dehydroeburicoic acid、15α-acetyldehydrosulphurenic acid、Antcin B、Zhankuic acid C、Antcin A、Antcin C and Antcin K這七個具有生理活性的三萜類化合物開發了一個準確、快速的LC-ESI-MS/MS的分析方法。
其LC-ESI-MS/MS優化條件如下：在負離子的模式下掃描，偵測範圍為150-700m/z，自動注射流速為5μL/min，毛細管溫度為400℃，氮氣流速為15arb，電噴灑電壓為3kV，然而麥角甾醇與羊毛甾醇二次撞擊之電壓大小分別為35% - 30%、39% - 42%。

Antrodia camphorata (AC) is a unique fungus in Taiwan, also known as Chang-chih or niu-chang-ku. The major bioactive constituents of AC are triterpenoids which reported to have various activities including anticancer and anti-inflammatory potential. There are two types comprising ergostane and lanostane of triterpenoids are reported from AC. The quality and content of active compounds in AC are dependent on harvest period, extraction methods and culture conditions. Thus, the quality control of active constituents in AC is of great importance.
To evaluate the quality of AC, in this study, we developed an accurate and rapid LC-ESI-MS/MS analytical method for the determination of five bioactive triterpenoids namely dehydroeburicoic acid, 15α-acetyldehydrosulphurenic acid, antcin B, zhankuic acid C, antcin A, antcin C and antcin K. The optimized mass spectrometry operating conditions were as follows: negative ionization mode, scan spectra from m/z 150 to 700, nitrogen flow rate of 5 μl/min, capillary temperature at 400 °C, nebulizer gas pressure 15 arb and voltage 3 kV. An amplitude voltage of 39 - 42% and 30 - 35% was typically used for lanostane and ergostane triterpenoids, respectively, fragmentation in the ion trap auto-MS2 experiments.

目錄
中文摘要 I
ABSTRACT II
致謝 III
目錄 V
表目錄 VIII
圖目錄 IX
第一章、前言 1
第二章、文獻回顧 3
2-1 牛樟芝簡介 3
2-1-1 牛樟芝介紹及分類 3
2-1-2 牛樟芝地理分布位置 5
2-1-3 牛樟芝形態特徵 7
2-1-4 牛樟芝成分 8
2-1-5 牛樟芝之應用 9
2-2 三萜類簡介 10
2-2-1 萜類與三萜類 10
2-2-2 三萜類的生理活性 14
2-2-3 牛樟芝三萜類之結構與生理活性 14
2-2-4 靈芝與牛樟之三萜類比較 19
2-3液相串聯質譜儀簡介 21
2-3-1 質譜儀基本架構 21
2-3-2 離子源之簡介 23
2-3-3 離子阱質量分析器 (Ion-trap analyzer) 25
2-3-4串聯質譜儀之簡介 27
2-3-5液相串聯質譜儀之應用 29
第三章、利用電噴灑質譜游離法建立牛樟芝三萜類之特性圖譜 30
3-1實驗材料與器材 30
3-1-1 標準品來源 30
3-1-2 分析常用溶劑與藥品 30
3-1-3 實驗設備 30
3-2 藥品配製 31
3-2-1牛樟芝三萜類標準品濃度配製 31
3-3 實驗方法 31
3-3-1 全圖譜掃瞄(Full-Scan) 31
3-3-2 串聯質譜分析(MS/MS) 32
3-4 結果與討論 32
3-4-1 ESI-MS與ESI-MS/MS最佳化條件 32
3-4-1 ESI-MS與ESI-MS/MS質譜定性分析 33
第四章、牛樟芝三萜類之串聯質譜定量分析研究 43
4-1實驗材料與器材 43
4-1-1 標準品來源 43
4-1-2實驗設備 43
4-2 藥品配製 44
4-2-1牛樟芝三萜類標準品儲備溶液配製 44
4-2-2牛樟芝三萜類標準品標準曲線溶液配製 44
4-3實驗方法 45
4-4 結果討論 46
第五章、結論與未來展望 63
參考文獻 65
附錄 71
附錄 Ι 中壓液相層析儀 ( MPLC ) 71
作者簡歷 76
表目錄
表2-1、萜類化合物的分類與分佈 13
表2-2、牛樟芝與靈芝比較表 20
圖目錄
圖2-1、牛樟芝子實體 4
圖2-2、牛樟樹分布圖 6
圖2-2、異戊二烯單體之結構式 11
圖2-3、甲戊二羥酸(Mevalonic acid）之結構式 11
圖2-4、鯊烯生合成(Biosynthesis) 12
圖2-5、羊毛甾醇之結構。 16
圖2-6、麥角甾醇之結構。 16
圖2-7、實驗室自行純化牛樟芝三萜類標準品之結構。 17
圖2-7(續)、實驗室自行純化牛樟芝三萜類標準品之結構。 18
圖2-8、質譜儀主要三大部分 22
圖2-9、質譜儀基本組件與架構 22
圖2-10、電噴灑離子源構造與質譜儀銜接介面 24
圖2-11、電噴灑所產生的帶電荷液滴形成氣相離子過程示意圖。 24
圖2-12、離子阱(ION-TRAP)示意圖。 26
圖2-13、串聯質譜示意圖 28
圖3-1、Dehydroeburicoic acid (AC2) ESI-MS之質譜分析圖。 36
圖3-2、Dehydroeburicoic acid (AC2) ESI-MS/MS之質譜分析圖。 36
圖3-3、15α-Acetyl dehydrosulphurenic acid (AC3) ESI-MS之質譜分析圖。 37
圖3-4、15α-Acetyl dehydrosulphurenic acid (AC3)ESI-MS/MS之質譜分析圖。 37
圖3-5、Antcin B (AC5) ESI-MS之質譜分析圖。 38
圖3-6、Antcin B (AC5) ESI-MS/MS之質譜分析圖。 38
圖3-7、Zhankuic acid C (AC7) ESI-MS之質譜分析圖。 39
圖3-8、Zhankuic acid C (AC7) ESI-MS/MS之質譜分析圖。 39
圖3-9、Antcin A (AC9) ESI-MS之質譜分析圖。 40
圖3-10、Antcin A (AC9) ESI-MS/MS之質譜分析圖。 40
圖3-11、Antcin C (AC10) ESI-MS之質譜分析圖。 41
圖3-12、Antcin C (AC10) ESI-MS/MS之質譜分析圖。 41
圖3-13、Antcin K (AC12) ESI-MS之質譜分析圖。 42
圖3-14、Antcin K (AC12) ESI-MS/MS之質譜分析圖。 42
圖4-1、Blank之ESI-MS圖譜。 48
圖4-2、Antcin B (AC5)之ESI-MS圖譜。 48
圖4-3、Antcin B (AC5)之ESI-MS圖譜。 48
圖4-4、Antcin B (AC5)之ESI-MS圖譜。 49
圖4-5、Antcin B (AC5)之ESI-MS圖譜。 49
圖4-6、Antcin B (AC5)之ESI-MS圖譜。 49
圖4-7、Antcin B (AC5)之離子層析圖。 50
圖4-8、Antcin B (AC5)之檢量線。 50
圖4-9、Blank之ESI-MS圖譜。 51
圖4-10、Zhankuic acid C (AC7)之ESI-MS圖譜。 51
圖4-11、Zhankuic acid C (AC7)之ESI-MS圖譜。 51
圖4-12、Zhankuic acid C (AC7)之ESI-MS圖譜。 52
圖4-13、Zhankuic acid C (AC7)之ESI-MS圖譜。 52
圖4-14、Zhankuic acid C (AC7)之ESI-MS圖譜。 52
圖4-15、Zhankuic acid C (AC7)之離子層析圖。 53
圖4-16、Zhankuic acid C (AC7)之檢量線。 53
圖4-17、Blank之ESI-MS圖譜 54
圖4-18、Antcin A (AC9)之ESI-MS圖譜。 54
圖4-19、Antcin A (AC9)之ESI-MS圖譜。 54
圖4-20、Antcin A (AC9)之ESI-MS圖譜。 55
圖4-21、Antcin A (AC9)之ESI-MS圖譜。 55
圖4-22、Antcin A (AC9)之ESI-MS圖譜。 55
圖4-23、Antcin A (AC9)之離子層析圖。 56
圖4-24、Antcin A (AC9)之檢量線。 56
圖4-25、Blank之ESI-MS圖譜。 57
圖4-26、Antcin C (AC10)之ESI-MS圖譜。 57
圖4-27、Antcin C (AC10)之ESI-MS圖譜。 57
圖4-28、Antcin C (AC10)之ESI-MS圖譜。 58
圖4-29、Antcin C (AC10)之ESI-MS圖譜。 58
圖4-30、Antcin C (AC10)之ESI-MS圖譜。 58
圖4-31、Antcin C (AC10)之離子層析圖。 59
圖4-32、Antcin C (AC10)之檢量線。 59
圖4-33、Blank之ESI-MS圖譜。 60
圖4-34、Antcin K (AC12)之ESI-MS圖譜。 60
圖4-35、Antcin K (AC12)之ESI-MS圖譜。 60
圖4-36、Antcin K (AC12)之ESI-MS圖譜。 61
圖4-37、Antcin K (AC12)之ESI-MS圖譜。 61
圖4-38、Antcin K (AC12)之ESI-MS圖譜。 61
圖4-39、Antcin K (AC12)之離子層析圖。 62
圖4-40、Antcin K (AC12)之檢量線。 62

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