臺灣博碩士論文加值系統

樟芝(Antrodia cinnamomea)，為台灣特有的野生真菌，生長於台灣的特有牛樟樹(Cinnamomum kanehirae)椴木上，其子實體生長速度非常緩慢，子實體中含有許多天然小分子化合物，其中的天然物4-acetylantroquinonol B(4-AAQB)，為此研究主要的重點，4-AAQB化合物對肝癌細胞HepG2具有抑制增殖活性之作用，本研究以液態發酵的方式生產4-AAQB，在有限空間之下，可大量生產發酵液，同時探討樟芝以液態發酵過程中在發酵液中4-AAQB的含量，本研究利用液態發酵生產方式，以提高4-AAQB 產率為目標，再將發酵液以乙酸乙酯(EtOAc)萃取，以MALDI-TOF/MS快速分析以確認發酵液中4-AAQB含量，並進一步開發定量方法，初步結果皿培已經得到與椴木顏色相符之類子實體，液態發酵生產4-AAQB四種條件，則以C條件為最佳， 可得到較佳的4-AAQB含量。

Antrodia cinnamomea is an unique wild fungus in Taiwan, which can only grow on the unique Cinnamomum kanehirae basswood. Its fruiting body grows very slowly. In this study, we focus at production of 4-acetylantroquinonol B (4-AAQB) which is a natural compound containing in A. Cinnamomea. 4-AAQB has been reported of anti-proliferative activity on hepatoma cell HepG2. In this study, a submerged cultivation of A. Cinnamomea was performed. Th ethyl acetate (EtOAc) extract of the fermentation broth was analyzed using MALDI-TOF/MS to identify the existence of 4-AAQB in fermentation broth. Further quantification method is now under development. Preliminary results have been consistent with dish culture of basswood color category fruiting bodies, Liquid fermentation 4-AAQB four kinds of conditions, C condition are the best available preferred 4-AAQB content.

目錄
中文摘要 I
英文摘要 II
致謝 III
第一章 前言 1
第二章 文獻回顧 2
2-1 樟芝的分類 2
2-2 牛樟芝的命名 3
2-3 外觀型態 4
2-4 樟芝的生理活性 7
2-5 生長條件的影響 11
2-5-1-1 溫度 11
2-5-1-2 pH值 12
2-5-1-3 攪拌與通氣 12
2-5-1-4 光照 12
2-5-2-1 碳源 13
2-5-2-2 氮源 13
2-5-2-3 碳氮比(C/N) 13
2-5-2-4 無機鹽類 14
2-5-2-5 生長因子 14
2-5-2-6 油脂、脂肪酸添加物 14
第三章 樟芝皿培及菌種保存 20
3-1實驗材料 20
3-2 實驗方法 22
3-3 結果與討論 29
第四章 樟芝液態發酵 30
4-1 實驗材料 30
4-2 實驗方法 31
4-2-2-1 前培養 31
4-2-2-2 主培養 32
第五章 4-acetylantroquinonol B分析 36
5-1 樣品來源 36
5-2 實驗材料與方法 37
5-3 結果與討論 40
5-4 4AAQB加入內在標準品分析圖譜濃度計算 42
第六章 實驗結果與未來展望 68
第七章 參考文獻 69
作者簡歷 74

表目錄

表3.1 菌株編號及菌株來源 20
表.3-2 樟芝添加試驗各條件 26
表.4-1 各條件培養基組成 33
表.5-1 MALDI-TOF/MS 操作參數設定 39
表. 5-2 分析物在MALDI-TOF/MS 質譜上出現之訊號 39
表. 5-3 四種條件逐週採樣發酵液及A公司凍乾粉4AAQB含量 47

圖目錄
圖.2-1牛樟芝子實體 2
圖.2-2牛樟芝子實體之顯微構造圖 5
圖.2-3樟芝子實體原始新種發表中的擔孢子圖(吳，2002) 6
圖.2-4a樟芝發現的三萜類化合物(Cherng和Chiang,1995) 15
圖.2-4b樟芝發現的三萜類化合物(楊，1996) 16
圖.2-4c樟芝發現的三萜類化合物(高，1992) 17
圖.2-4d樟芝發現的三萜類化合物(程，1994) 18
圖2.4e樟芝發現的三萜類化合物(吳，1995) 19
圖.3-1 樟芝菌種 21
圖.3-2 皿培菌種培養 23
圖.3-3 樟芝菌種保存 24
圖.3-4 樟芝子實體切塊 25
圖.3-5 子實體分離後篩選之菌種 25
圖.3-6 平面培養實驗流程圖 27
圖. 3-7 皿培各條件添加試驗 28
圖. 3-8 皿培通入O2試驗 28
圖.4-1 菌種活化 33
圖.4-2 6L桌上型發酵槽系統 34
圖.4-3 樟芝菌絲於發酵槽中生長型態 34
圖.4-4 液態發酵實驗流程圖 35
圖.5-1 4-acetylantroquinonol B之結構 36
圖. 5-2 基質2,5-DHB之MALDI-TOF/MS 質譜圖 44
圖. 5-3 10 ppm 4AAQB以2,5-DHB為基質之MALDI-TOF/MS質譜圖 45
圖. 5-4 5 ppm及10 ppm Cholesterol以2,5-DHB為基質之MALDI-TOF/MS質譜圖 46
圖. 5-5 以Cholesterol 作為內在標準品 4AAQB之標準曲線 48
圖.5-6發酵液條件A、B、C、D逐週採樣之含量變化 49
圖. 5-7 10、50、100 ppm 菌絲萃取物以2,5-DHB為基質，4AAQB在MALDI-TOF/MS質譜圖 50
圖. 5-8 1000 ppm A公司凍乾粉萃取物與Cholesterol 10 ppm，之MALDI-TOF/MS 質譜圖 51
圖.5-9 條件A發酵一週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 52
圖.5-10 條件A發酵二週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 53
圖.5-11 條件A發酵三週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 54
圖.5-12 條件A發酵四週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 55
圖.5-13 條件B發酵一週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 56
圖.5-14 條件B發酵二週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 57
圖.5-15 條件B發酵三週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 58
圖.5-16 條件B發酵四週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 59
圖.5-17 條件C發酵一週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 60
圖.5-18 條件C發酵二週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 61
圖.5-19 條件C發酵三週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 62
圖.5-20 條件C發酵四週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 63
圖.5-21 條件D發酵一週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 64
圖.5-22 條件D發酵二週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 65
圖.5-23 條件D發酵三週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 66
圖.5-24 條件D發酵四週後萃取物 1000 ppm 與 Cholesterol 10 ppm之MALDI-TOF/MS質譜圖 67

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