臺灣博碩士論文加值系統

輔酵素Q10 是一種存在於體內細胞的物質，他是一種抗氧化劑，科學家相信抗氧化劑可以對抗被稱為自由基的對身體有害粒子，因為自由基會造成老化，以及健康問題、心臟病、癌症。近年來，化妝品界發現輔酵素Q10是不錯的皮膚護理成份。
本研究是建立一套HPLC的分析方法來檢測美容水膠貼布中輔酵素Q10的成份含量與穩定性，移動相為甲醇：二氯甲烷，比例為65：35，層析管柱是 ODS Hypersil (4.6mm × 250mm ; 5μm)，流速：1 mL / min，注射量：10μL，偵測波長：275 nm，此分析條件可在十分鐘內完成，輔酵素Q10波峰出現在6.28分鐘。
在分析方法的確效中，Coenzyme Q10的分析結果如下：相對標準偏差(RSD)介於0.11％到1.45%之間，其回收率為92.09％至101.76%，線性迴歸係數(R2)為0.9991，偵測極限是0.53 ppm，定量極限為1.74 ppm 。
在安定性試驗結果中，分別存放25℃和40℃之中，在此條件下存放六個月。發現Coenzyme Q10水膠貼布的外觀並不會有變化，顏色以依然保持淡黃色，在25℃條件下Coenzyme Q10含量含有92.18％，在40℃條件下輔酵素Q10含量含有85.34％。

Coenzyme Q10 is a substance, it is found in almost every cell in the body, and it is a powerful antioxidant. Scientists believe free radicals contribute to the aging process, as well as a number of health problems, including heart disease and cancer. Lately, cosmetic scientist found that Coenzyme Q10 is a relatively good ingredient in skin health.

In the research, a gas chromatography method was developed to determine the content and stability of Coenzyme Q10 in beauty hydrogel patch. The mobile phases were methanol and dichloromethane with the ratio of 65 to 35. Chromatographic column is ODS Hypersil(4.6mm × 250mm ; 5μm), flow rate set at 1.0 mL/min an injection of 10 μL, UV/Vis absorption set at 275nm, total run time was 10 min, Coenzyme Q10 peak at the 6.28 min.

In the analytical method validation of Coenzyme Q10 in beauty hydrogel patch, the results of relative standard deviation are between 0.11% and 1.45%; the results of recovery are between 92.09% and 101.76%; the result of linear regression coefficient is 0.9991; the result of limit of detection is 0.53 ppm; the result of limit of quantification is 1.74 ppm.
In the stability tests, Coenzyme Q10 beauty hydrogel patch was placed in the room temperature condition (25℃) and the accelerated condition (40℃) for six-month stability test. The appearance of product did not significantly change and the content of Coenzyme Q10 was declined to 92.18 ％ in the room temperature test and declined to 85.34％ in the accelerated test at the six month.

目錄
摘要………………………………………………………………………………I
Abstract…………………………………………………………………………II
誌謝……………………………………………………………………………IV
目錄……………………………………………………………………………V
表目錄………………………………………………………………………VIII
圖目錄…………………………………………………………………………X
第一章：緒論
一、簡介…………………………………………………………………………1
二、研究目的……………………………………………………………………3
三、高效能液相層析儀原理與簡介……………………………………………5
第二章：實驗
一、藥品………………………………………………………………………15
二、儀器………………………………………………………………………16
三、輔酵素Q10成份介紹……………………………………………………17
四、美容水膠貼布成份介紹…………………………………………………22
五、高效能液相層析儀分析條件建立………………………………………36
六、萃取方法的建立…………………………………………………………39
七、高效能液相層析儀分析方法確效………………………………………40
1. 系統穩定性…………………………………………………………………40
2. 專一性………………………………………………………………………40
3. 精密度………………………………………………………………………42
4. 線性…………………………………………………………………………42
5. 準確度………………………………………………………………………42
6. 偵測極限、定量極限………………………………………………………43
7. 分離因子之計算……………………………………………………………43
八、美容水膠貼布的製作(含Coenzyme Q10) ………………………………44
九、空白水膠貼布的製作……………………………………………………46
十、不同溫度與時間對水膠貼布之影響……………………………………46
十一、標準品與內標準品溶液配製…………………………………………46
十二、美容水膠貼布添加樣品之濃度………………………………………47
十三、萃取含量的計算………………………………………………………47
第三章：結果與討論
一、高效能液相層析儀分析條件建立………………………………………48
二、萃取方法的建立…………………………………………………………55
三、高效能液相層析儀方析方法確效………………………………………56
1. 系統穩定性…………………………………………………………………56
2. 專一性………………………………………………………………………57
3. 精密度………………………………………………………………………67
4. 線性…………………………………………………………………………73
5. 準確度………………………………………………………………………74
6. 偵測極限、定量極限………………………………………………………76
7. 分離因子之計算……………………………………………………………76
四、不同時間對美容水膠貼布濃度的影響…………………………………77
五、不同時間對美容水膠貼布外觀的影響…………………………………80
第四章：結論…………………………………………………………………81
第五章：參考文獻……………………………………………………………83




















表目錄
表1：高效能液相層析儀管柱尺寸……………………………………………11
表2：正相層析法與逆相層析法的比較………………………………………11
表3：各種層析管柱中填充物的官能基………………………………………12
表4：美容水膠貼布配方………………………………………………………45
表5：比較不同有機溶劑的影響………………………………………………48
表6：不同移動相比例的比較…………………………………………………50
表7：本實驗最適當之HPLC分析條件………………………………………54
表8：不同甲醇與二氯甲烷比例萃取溶劑的比較……………………………55
表9：以50 ppm六重複注射結果數據表示系統穩定性……………………56
表10：標準品與美容水膠貼布樣品成份滯留時間之數據…………………57
表11：破壞性試驗的波峰面積數據…………………………………………66
表12：Coenzyme Q10標準品次與次間再現性的層析數據…………………68
表13：Coenzyme Q10標準品日與日間再現性之第一天的層析數據………69
表14：Coenzyme Q10標準品日與日間再現性之第二天的層析數據………70
表15：Coenzyme Q10標準品日與日間再現性之第三天的層析數據………71
表16：Coenzyme Q10標準品校正曲線三重複注射的數據……………………73
表17：標準品與樣品之濃度比較……………………………………………75
表18：Coenzyme Q10的回收率數據…………………………………………75
表19：Coenzyme Q10的偵測極限與定量極限………………………………76
表20：分析主成分的滯留因子與理論板數…………………………………76
表21：Coenzyme Q10在25℃時的安定性數據………………………………77
表22：Coenzyme Q10在40℃時的安定性數據………………………………78
表23：Coenzyme Q10在25℃及40℃的環境下6個月間的含量變化………79
表24：水膠貼布在25℃及40℃的環境下6個月間的顏色與外觀變化……80


























圖目錄
圖1：高效能液相層析儀的應用………………………………………………8
圖2：高效能液相層析儀儀器…………………………………………………14
圖3：高效能液相層析儀示意圖………………………………………………14
圖4：Q10標準品的UV吸收圖譜，最大吸收再275 nm………………………36
圖5：試驗文獻方法一，無法成功分析出標準品…………………………37
圖6：試驗文獻方法二，層析時間為19.426分鐘……………………………38
圖7：美容水膠貼布成品(含1% Coenzyme Q10樣品) ………………………44
圖8：Coenzyme Q10標準品在移動相甲醇：二氯甲烷(85：15)的HPLC層析圖譜…………………………………………………………………………49
圖9：Coenzyme Q10標準品在移動相甲醇：乙腈：二氯甲烷(70：15：15)的HPLC層析圖譜……………………………………………………………49
圖10：Coenzyme Q10標準品在移動相甲醇：二氯甲烷(85：15)的HPLC層析圖譜…………………………………………………………………………51
圖11：Coenzyme Q10標準品在移動相甲醇：二氯甲烷(80：20)的HPLC層析圖譜…………………………………………………………………………51
圖12：Coenzyme Q10標準品在移動相甲醇：二氯甲烷(75：25)的HPLC層析圖譜…………………………………………………………………………52

圖13：Coenzyme Q10標準品在移動相甲醇：二氯甲烷(70：30)的HPLC層析圖譜…………………………………………………………………………52
圖14：Coenzyme Q10標準品在移動相甲醇：二氯甲烷(65：35)的HPLC層析圖譜…………………………………………………………………………53
圖15：Coenzyme Q10標準品在移動相甲醇：二氯甲烷(60：40)的HPLC層析圖譜…………………………………………………………………………53
圖16：本實驗最適當之HPLC層析圖譜……………………………………54
圖17：系統穩定性50ppm六重複注射的層析圖譜疊圖……………………57
圖18：樣品稀釋溶劑(異丙醇)之層析圖譜……………………………………58
圖19：空白美容水膠貼布之層析圖譜………………………………………58
圖20：空白貼布中的對羥苯甲酸甲酯標準品層析圖譜……………………58
圖21：20ppm Coenzyme Q10標準品之層析圖譜……………………………59
圖22：接近20ppm之Coenzyme Q10美容水膠貼布之層析圖譜……………59
圖23：圖23：Q10標準品的UV吸收圖譜，最大吸收再275 nm……………60
圖24：圖24：Q10樣品的UV吸收圖譜，最大吸收再275 nm………………60
圖25：(A)－未經過任何破壞之樣品溶液之層析圖譜………………………61
圖26：(B)－加熱破壞之樣品溶液之層析圖譜………………………………62
圖27：(C)－酸化破壞之樣品溶液之層析圖譜………………………………63
圖28：(D)－鹼化破壞之樣品溶液之層析圖譜………………………………64
圖29：(E)－氧化破壞之樣品溶液之層析圖譜………………………………65
圖30：3% H2O2標準品層析圖譜………………………………………………65
圖31：(F)－UV照射破壞之樣品溶液之層析圖譜…………………………66
圖32：Coenzyme Q10標準品次與次間再現性的層析圖……………………68
圖33：Coenzyme Q10標準品日與日間再現性之第一天的層析圖疊圖……70
圖34：Coenzyme Q10標準品日與日間再現性之第二天的層析圖疊圖……71
圖35：Coenzyme Q10標準品日與日間再現性之第三天的層析圖疊圖……72
圖36：Coenzyme Q10標準品三重複注射的校正曲線……………74
圖37：Coenzyme Q10在25℃及40℃的環境下，6個月間含量變化曲線圖…80

1.Chen. R. K., “Principle of LC-MS-MS and its Application in Food Analysis Food Industries”, Taiwan R.O.C, Vol. 33, No. 3, pp.44~54(2001).
2.盧正權，”儀器總覽-化學分析儀器”，國研院儀科中心，新竹，第 103 頁。
3.Douglas A. Skoog, F. James Holler, Timothy A. Nieman, “Principles of Instrumental Analysis” 6th Edition, pp.762~783, 816~831(2006).
4.Argoudelis. C. J., “Isocratic Liquid Chromatograph Method for Aspartame and Other Additives in Soft Drinks”, Journal of Chromatography, 303, pp.256~262 (1984).
5.Sandie Lindsay,“High Performance Liquid Chromatography” 2nd edition, London: Wiley ( 1992 ).
6.Crane. F.; Hatefi. Y.; Lester. R.; Widmer. C., “Isolation of a quinone from beef heart mitochondria”. Biochimica et Biophysica Acta 25(1957).
7.Peter. H. Langsjoen, M.D., F.A.C.C. “Introduction to Coezyme Q10”
pp. 1~13(2008).
8.Donald E.; Hoffman, Carl H.; Trenner, Nelson R.; Arison, Byron H.; Shunk, Clifford H.; Linn, Bruce O.; McPherson, James F.; Folkers, Karl. Journal of the American Chemical Society Vol. 80, No. 17, pp. 47-52(1958).
9. Molyneux S. L.; Florkowski C. M. George PM, et al. ”Coenzyme Q10 an independent predictor of mortality in chronic heart failure” J. Am. Coll. Cardiol. Vol. 52, No. 18, pp. 1435–1441(2008).
10. Quiles, J; Ochoa, JJ; Huertas, JR; Mataix, J. “Coenzyme Q 10 supplementation protects from age-related DNA double-strand breaks and increases lifespan in rats fed on a PUFA-rich diet”. Experimental Gerontology Vol. 39, No. 2, pp. 189–194(2004).
11.Sakano, K.; Takahashi, M.; Kitano, M.; Sugimura, T.; Wakabayashi, K. “Suppression of azoxymethane-induced colonic premalignant lesion formation by coenzyme Q10 in rats”. Asian Pacific journal of cancer prevention : APJCP Vol. 7, No. 4, pp. 599–603(2006).

12.Shults, C. W.; Oakes, D.; Kieburtz, K.; Beal, M. F.; Haas, R.; Plumb, S.; Juncos, J. L.; Nutt, J. et al. “Effects of Coenzyme Q10 in Early Parkinson Disease: Evidence of Slowing of the Functional Decline”. Archives of Neurology Vol. 59, No. 10, pp. 1541–1550(2002).
13.Watts, T. L. “Coenzyme Q10 and periodontal treatment: is there any beneficial effect?”. British Dental Journal 178: 209-213(1995).
14. Folkers, K.; Hanioka, T.; Xia, L.; McReejr, J.; Langsjoen, P. “Coenzyme Q10 increases T4/T8 ratios of lymphocytes in ordinary subjects and relevance to patients having the aids related complex”. Biochemical and Biophysical Research Communications Vol. 176, No. 2, pp. 786–791(1991).
15. Rozen, T. D.; Oshinsky, M. L.; Gebeline, C. A.; Bradley, K. C.; Young, W. B.; Shechter, A. L.; Silberstein, S. D. “Open label trial of coenzyme Q10 as a migraine preventive”. Cephalalgia Vol. 22, No. 2, pp. 137–141(2002).
16.Klaus Weissermel, Hans-Jurgen Arpe, Charlet R. Lindley, Stephen Hawkins. “Chap. 7. Oxidation Products of Ethylene”. Industrial Organic Chemistry. pp. 159–161(2003).
17.Sohoni, S.; Sridhar, R.; Mandal, G. “The effect of grinding aids on the fine grinding of limestone, quartz and Portland cement clinker”. Powder Technology Vol. 67, No. 3, pp. 277–286(1991).
18.Nalam, P. C.; Clasoahm, J. N.; Mashaghi, A. et al. “Macrotribological Studies of Poly(L-lysine)-graft-Poly(ethylene glycol) in Aqueous Glycerol Mixtures” Vol. 37, No. 3, pp. 541-552(2010).
19.Hudgens, R.; Hercamp, R.; Francis, J.; Nyman, D. et al. “An Evaluation of Glycerin (Glycerol) as a Heavy Duty Engine Antifreeze/Coolant Base” pp. 1-4 (2007).
20.Lide, D. R., “Handbook of Data on Organic Compounds”, 3rd ed.; CRC Press, Inc, Boca Raton, FL, pp. 43-86(2008).
21.Aldrich Chemical Company. Catalog handbook of fine chemicals. (2003).
22.Castor oil. International Chemical Safety Cards. NIOSH, CDC, USA, (2009).
23.Castor oil in the GESTIS Substance Database from the IFA, accessed on (2009).
24.Castor Oil. Facts Castor Oil Facts. Kristina''s Oil (2009).

25.Wilson, R.; Van Schie, B. J.; Howes, D. “Overview of the preparation, use and biological studies on polyglycerol polyricinoleate (PGPR)”. Food Chem. Toxicol, Vol. 36, No. 9/10, pp. 711–718(1998).
26.Busso, C.; Castro-Prado, M. A. “Cremophor EL stimulates mitotic recombination in uvsH//uvsH diploid strain of Aspergillus nidulans.” An. Acad. Bras. Cienc. Vol. 76, No. 1, pp. 49–55(2004).
27.Ayorinde, F. O.; Gelain, S. V.; Johnson, J. H.; Wan, L. W. “Analysis of some commercial polysorbate formulations using matrix-assisted laser esorption/ionizat on time-of-flight mass spectrometry”. Rapid. Commun. Mass. Spectrom. Vol. 14, No. 22, pp. 2116–2124(2000).
28.“Toxicological evaluation of some food additives including anticaking agents, antimicrobials, antioxidants, emulsifiers and thickening agents”. WHO Food Additives Series No. 5. World Health Organization(1974).
29.What are the components of a typical disposable diaper, “Frequently Asked Questions about Disposable Diapers. The Disposable Diaper Net”. Accessed (2009).
30.History of Super Absorbent Polymer Chemistry, M2 Polymer Technologies, Inc. Accessed (2009).
31.Siciliano, G.; Mancuso, M. et al. “Coenzyme Q10, exercise lactate and CTG trinucleotide expansion in myotonic dystrophy” Vol. 56, No. 3/4, pp. 405–410(2001).
32.Boitier, E.; Degoul, F. “A case of mitochondrial encephalomyopathy associated with a muscle coenzyme Q10 deficiency”. Journal of Sciences Vol. 156, No. 1, pp. 41–46(1998).
33.江平;鄭郁芳 等 “反相高效液相色譜法測定化妝品中輔酶 Q10的含量”。 Vol. 23, No.11, pp. 30-32(2004).
34.Petra, J.; Mateja, P. et al. “HPTLC and HPLC–MS Quantification of Coenzyme Q10 and Cholesterol in Fractionated Chicken-Breast Tissue”. Journal of Planar Chromatography Vol. 22, No. 6, pp. 395-398(2009).
35.Nazzal, S.; Guven, N. “Preparation and characterization of coenzyme Q10- Eudragit solid dispersion”. Drug. Dev. Ind. Pharm. Vol. 28, No. 1, pp. 49-57(2002)
36.Tang, P.; Miles, M.; DeGrauw, A. et al. “HPLC Analysis of Reduced and Oxidized Coenzyme Q10 in Human Plasma”. Clinical Chemistry Vol. 7, No. 2, pp. 256–265 (2001)
37.Tang, P. H.; Miles, M. V. et al. “Measurement of reduced and oxidized coenzyme Q9 and coenzyme Q10 levels in mouse tissues by HPLC with coulometric detection”. Clinica Chimica Acta Vol. 341, No. 1/2, pp. 173–184 (2004).
38.Appelkvist, E.L.; Geromel, V.; et al. “Quinone-responsive multiple respiratory-chain dysfunction due to widespread coenzyme Q10 deficiency”. Lancet, Vol. 356, No. 9227, pp. 391-395, (2000)
39.岳兵; 吳黎明; 等. “高效液相色譜法測定蜂王幼蟲中輔酶Q10含量”。 Vol. 31, No. 10, pp. 206-208(2010).
40.吳俊志，”維他命 C 磷酸鎂鹽水膠面膜的製造與穿透性試驗”，碩士論文，朝陽 科技大學應用化學研究所，台中 (2005).
41.李鵑汝，”利用高效液相層析儀探討美白產品配方的安定性”，碩士論文，朝陽 科技大學應用化學研究所，台中 (2006).
42.張呈彰，”Flurbiprofen 水性藥膠布配方改良及品管方法建立”，碩士論文，朝陽 科技大學應用化學研究所，台中 (2011).