臺灣博碩士論文加值系統

紫外線會對皮膚造成各種傷害，例如曬傷、曬黑、光老化及導致皮膚癌發生等。細胞若受紫外線照射，則會分泌細胞激素或合成蛋白質來對抗紫外線所造成的傷害。在黑色素細胞中，由酪胺酸酶合成的黑色素，是一種能保護細胞不受紫外線傷害的色素，但卻會使皮膚變黝黑。因此，本研究欲以中草藥樟芝醱酵物探討對受紫外線照射的B16-F10細胞是否具有抑制酪胺酸酶且保護細胞之功效。以黃芩、綠茶、何首烏及甘草四種中藥作為與樟芝共同醱酵之藥材，經水及乙醇萃取後，將其應用在細胞及受紫外線照射的細胞上，測其細胞存活率及酪胺酸酶之含量。結果發現所有的醱酵物水萃液對細胞不會明顯抑制細胞生長及酪胺酸酶含量；而醱酵物乙醇萃取液對於細胞具有不同程度的毒殺作用，但除了何首烏組，其餘組別均具有抑制酪胺酸酶活性之效果。細胞在照射紫外線時加入黃芩樟芝固態醱酵物水萃液或乙醇萃取液，可以保護細胞不受紫外線之傷害，亦可以降低細胞受紫外線所誘導產生之酪胺酸酶含量。細胞在照射紫外線後加入黃芩樟芝固態醱酵物水萃液，可以提升細胞存活率，但酪胺酸酶含量卻是照光控制組的2倍以上。細胞在照射紫外線後加入黃芩樟芝固態醱酵物乙醇萃取液可以降低酪胺酸酶含量，但會對細胞造成殺傷力。因此可知，黃芩樟芝固態醱酵物水萃及乙醇萃取液均具有保護細胞之效果。因此，期待未來以動物模式更進一步驗證中草藥樟芝醱酵物之美白效果。

The ultraviolet can lead to cutaneous damage, for instance, sunburn, tanning, photoaging and photocarcinogenesis. Cell irradiated by UV can secrete cytokines and synthesize proteins to resist the damage by UV. The melanin, a pigment synthesized by tyrosinase in the melanocytes, can protect cell against UV but make skin dark. Therefore, the objective of this research is to estimate the tyrosinase inhibition and photoprotection effect by herbal fermentation products with Antrodia camphorata on B16-F10 cell irradiated with UV. Several sorts of herbs including Polygonum multiflorum, Scutellaria baicalensis, Glycyrrhiza uralensis and Camellia sinensis were fermented with Antrodia camphorata.Water and ethanol extracts of fermented products were used to test the cell viability and the capacity of tyrosinase on the cells and irradiated cells. It was found that all water extracts can not inhibit cell growth and tyrosinase capacity. But ethanol extracts of fermented products with herbs can cause different effect of cytotoxicity and inhibiting tyrosinase excluding that with Polygonum multiflorum. Both water and ethanol extracts of fermented product with Scutellaria baicalensis , adding into the cell while irradiation, can protect cell from UV damage and inhibit tyrosinase. Water extracts of fermented product with Scutellaria baicalensis, adding into the cell after irradiation, can increase cell viability, but the capacity of tyrosinase is twice in comparision with irradiated control. Ethanol extract, adding into the cell after irradiation, is also able to inhibit tyrosinase. In conclusion, both water and ethanol extracts of fermented product with Scutellaria baicalensis can protect cell from UV damage. However, ethanol extract have distinguished inhibition on tyrosinase in the cell after cell irradiation, but water extract does not. Therefore, it should be interesting to learn about the tyrosinase inhibition and photoprotection effect by herbal fermentation products with Antrodia camphorata treated on the animal model in the future.

摘要 I
Abstract II
誌謝 III
目次 IV
表目錄 VII
圖目錄 VIII
第一章 前言 1
第二章 文獻回顧 3
2.1 樟芝 3
2.2 皮膚 4
2.2.1 皮膚的層次 4
2.2.2 膚色與黑色素 5
2.3 紫外線 7
2.4 防曬原理 9
第三章 中藥簡介 14
第四章 材料與方法 19
4.1 實驗架構 19
4.2 實驗材料 19
4.3實驗藥品 20
4.4儀器設備 21
4.5 實驗方法 21
4.5.1 中草藥及固態基質之篩選 21
4.5.2 樟芝液態菌絲體醱酵 22
4.5.3 樟芝固態醱酵 23
4.5.4 萃取液及醱酵液之吸光值測定 23
4.5.5 細胞防曬及美白評估之實驗架構 24
4.5.6 B16-F10細胞培養 25
4.5.7 萃取液對細胞存活率之影響 26
4.5.8 測量細胞內酪胺酸酶之含量 27
4.5.9 決定紫外線照射細胞之時間 27
4.5.10 評估樟芝醱酵物對受紫外線照射的細胞之影響 28
4.5.11 HPLC分析 29
第五章 結果與討論 30
5.1.1 中草藥水萃液之UV-A與UV-B吸光值篩選 30
5.1.2 中草藥乙醇萃取液之UV-A與UV-B吸光值篩選 31
5.2 各種豆類熱水萃取之吸光值及萃取率 35
5.3 樟芝菌絲體之生長曲線 37
5.4.1 中藥對樟芝菌絲體生長之影響 39
5.4.2 中草藥樟芝液態醱酵液及菌絲體萃取液之吸光值 39
5.5 加入中藥樟芝固態醱酵之吸光值及生長情形 45
5.6 樟芝固態醱酵物萃取液對B16-F10細胞存活率之影響及抑制酪胺酸酶含量之效果 52
5.6.1 中草藥樟芝固態醱酵物水萃液對B16-F10細胞生長之影響 52
5.6.2 中草藥樟芝固態醱酵物水萃液對B16-F10細胞內酪胺酸酶含量之影響 53
5.6.3 中草藥樟芝固態醱酵物乙醇萃取液對B16-F10細胞內酪胺酸酶含量之影響 53
5.6.4 中草藥樟芝固態醱酵物乙醇萃取液對B16-F10細胞內酪胺酸酶含量之影響 54
5.7 紫外線照射時間的長短對細胞存活率之影響 59
5.8 黃芩固態醱酵水萃液對受照射紫外線的B16-F10細胞存活率之影響及抑制酪胺酸酶含量之效果 64
5.9 黃芩固態醱酵乙醇萃取液對受照射紫外線的B16-F10細胞存活率之影響及抑制酪胺酸酶含量之效果 73
5.10 黃芩固態及液態醱酵之HPLC 83
第六章 結論 88
第七章 參考文獻 89
第八章 附錄 92

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