臺灣博碩士論文加值系統

三萜類(triterpenes)在自然界分佈廣泛，部分的植物、動物及菌類都含有此類化合物，但從不同動植物身上所發現的三萜類種類及含量又有些許不同。三萜類具有抑制癌細胞生長和抗氧化活性的特性，而一般的三萜類多是由羊毛甾醇(lanostane)或麥角甾醇(ergostane)所組成，則牛樟芝子實體具較高藥理活性之三萜類大都以麥角甾醇為主。本實驗利用固態基質培養牛樟芝菌絲，以液態培養形式，將菌液接種至固態培養基當中，觀察紀錄菌絲生長型態，以利進行三萜類含量分析。且本實驗擬測試運用單磷酸腺苷(AMP)做為內在標準品以HPLC定量分析牛樟芝三萜類，初步實驗證實AMP與三萜類可以相同的溶劑沖提，且兩者在HPLC當中有著不同的滯留時間，所以可進一步研究AMP是否適合做為三萜類HPLC定量分析的內在標準品化合物，適當發展之後從HPLC分析圖譜的波鋒面積比值計算與三萜類濃度之間的相關性，依其良好的相關性即可建立標準曲線並由標準曲線可推算出每一種樟芝樣品溶液中所含三萜類的濃度。

Triterpenoids are widely distributed in nature, some of the plants, animals and fungi contain these compounds, but the type and content of triterpenoids found in different plants and animals who have a little different, triterpenoids inhibit cancer cell growth and anti-oxidation activity characteristics.And general triterpenoids mostly by the lanostane or ergostane composed, the fruiting bodies of Antrodia with triterpenoids mostly in higher pharmacological activity of ergosterol-based.In this study, the use of solid matrix culture Antrodia mycelium in liquid culture in the form of the bacteria were inoculated solid medium, observation records mycelial growth patterns, in order to facilitate analysis of triterpenoids content.And experiments intended to test the use of adenosine monophosphate (AMP) as the internal standard in HPLC quantitative analysis of Antrodia triterpenoids, preliminary experiments confirmed that AMP and triterpenoids elution use the same solvent, and both of them have different in HPLC retention time. Therefore, further studies can be used as the internal standard compound triterpenoids HPLC. AMP is suitable for quantitative analysis, after proper development of the ratio calculated from the HPLC chromatogram of the area of the wave front triterpenes correlation between concentration, according to their good correlation resistance to the establishment of a standard curve can be calculated by the standard curve concentration of each sample solution contained Antrodia triterpenoids.

目錄
中文摘要 I
Abstract II
致謝 IV
目錄 VI
表目錄 VIII
圖目錄 IX
第一章 前言 1
第二章 文獻回顧 3
2-1樟芝的介紹 3
2-2外觀型態 4
2-3 樟芝的分類 5
2-4 牛樟芝的命名 5
2-5 樟芝的成份分析 7
2-5-1 多醣體(Polysaccharides) 8
2-5-2三萜類化合物（Triterpenoids） 9
2-5-3 超氧歧化物酵素(Superoxide dismustase;SOD) 10
2-6生長條件影響 11
2-6-1物理因素 11
2-6-1-1溫度 11
2-6-1-2 pH值 11
2-6-1-3攪拌與通氣 12
2-6-1-4光照 12
2-6-2化學因素 12
2-6-2-1碳源 12
2-6-2-2氮源 13
2-6-2-3碳氮比(C/N) 13
2-6-2-4無機鹽類 13
2-6-2-5生長因子 13
2-6-2-6油脂、脂肪酸添加物 14
第三章 牛樟芝皿培培養 15
3-1實驗材料 15
3-1-1菌種來源 15
3-1-2實驗藥品 17
3-1-3儀器設備 17
3-2實驗方法 17
3-2-1皿培培養基製備與接種菌種 17
3-2-2菌種保存 19
3-2-3椴木牛樟芝子實體繼代培養 20
3-2-4皿培培養基添加麥粉 21
3-2-5皿培培養通氣試驗 22
第四章 牛樟芝固態基質培養 23
4-1實驗材料 23
4-1-1實驗藥品 23
4-1-2實驗設備 23
4-2實驗方法 23
4-2-1牛樟芝大麥基質培養 23
4-2-2實驗流程 24
4-2-3皿培 24
4-2-4前培 25
4-2-5瓶培 26
4-2-6瓶培菌絲生長型態 28
4-2-7瓶培固態接種 33
第五章 三萜類分析 38
5-1 樣品來源 38
5-2 實驗材料與方法 45
5-2-1 HPLC分析用溶劑 45
5-2-2儀器設備 45
5-2-3 HPLC三萜類分析條件 46
5-3皿培培養基菌絲三萜類分析 48
5-3-1皿培培養基菌絲三萜類HPLC分析圖譜 49
5-4椴木培養牛樟芝子實體三萜類HPLC分析圖譜 51
5-5牛樟芝三萜類運用內在標準品定量 52
5-5-1內標品條件 52
第六章 實驗結果與未來展望 55
第七章 參考文獻 56
作者簡歷 61

表目錄
表.3-1 樟芝菌株編號與菌株來源 15
表.5-1三萜類化合物種類 38
表.5-2 HPLC分析條件 46
表.5-3 三萜類化合物HPLC分析滯留時間 47

圖目錄
圖.2-1牛樟芝 4
圖.3-1 樟芝菌種平面培養 16
圖.3-2皿培培養基與菌種 18
圖.3-3平面培養基菌塊 19
圖.3-4牛樟芝子實體切塊 20
圖.3-5椴木子實體分離之菌種 20
圖.3-6原條件培養基之菌種 21
圖.3-7添加麥粉培養基之菌種 22
圖.4-1牛樟芝皿培菌種 25
圖.4-2牛樟芝前培菌種製備 25
圖.4-3液態培養菌絲球 26
圖.4-4瓶培培養基製備 27
圖.4-5瓶培第一週菌絲生長型態 28
圖.4-6瓶培第一週菌絲生長型態(近照) 29
圖.4-7瓶培第二週菌絲生長型態 30
圖.4-8瓶培第三週菌絲生長型態 31
圖.4-9瓶培第三週菌絲生長型態(近照) 32
圖.4-10瓶培固態接種第一週菌絲生長型態 33
圖.4-11瓶培固態接種第二週菌絲生長型態 34
圖.4-12瓶培固態接種第三週菌絲生長型態 35
圖.4-13瓶培固態接種第四週菌絲生長型態 36
圖.4-14瓶培固態接種第五週菌絲生長型態 37
圖.5-1 Methyl antcinate B (AC1) 39
圖.5-2 Dehydroeburicoic acid (AC2) 39
圖.5-3 15α-Acetyldehydrosulphurenic acid(AC3) 40
圖.5-4 3β,15α-Dihydroxylanosta-7,9(11),24-triene-21-oic acid(AC4) 40
圖.5-5 Antcin B(AC5) 41
圖.5-6 Dehydrosulphurenic acid(AC6) 41
圖.5-7 Zhankuic acid C(AC7) 42
圖.5-8 Sulphurenic acid(AC8) 42
圖.5-9 Antcin A(AC9) 43
圖.5-10 Antcin C(AC10) 43
圖.5-11 Methylantcinate A(AC11) 44
圖.5-12 Antcin K(AC12) 44
圖.5-13皿培培養基搗碎 48
圖.5-14標準皿培菌絲HPLC分析圖譜 49
圖.5-15標準皿培(通氣)菌絲HPLC分析圖譜 49
圖.5-16添加大麥皿培菌絲HPLC分析圖譜 50
圖.5-17添加大麥皿培(通氣)菌絲HPLC分析圖譜 50
圖.5-18牛樟芝子實體HPLC分析圖譜(248nm) 51
圖.5-19牛樟芝子實體HPLC分析圖譜(203nm) 51
圖.5-20單磷酸腺苷(AMP) 52
圖.5-22 AMP+AC6(HPLC分析圖譜 53
圖.5-23 AMP+AC2分析圖譜 54
圖.5-24 AC2定量檢量線圖譜 54

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