樟芝(Antrodia camphorata)，又名牛樟芝及牛樟芝，是屬於擔子菌門(Basidiomycota)。樟芝在台灣通常用來預防及治療各種疾病，包括酒精中毒、毒品中毒、皮膚癌及各種癌症。僅生長在台灣特有牛樟樹上(Cinnamomum kanehirai Hay)。由許多分離與分析研究得知，除了多醣體(Polysaccharides)之外，樟芝有許多的生理活性成分化合物，包括萜類(terpenoids)、苯類(benzenoids)、木脂素(lignans)、苯的衍生物(benzoquinone derivatives)、琥珀和馬來酸衍生物(succinic and maleic derivatives)。在此研究發現培養時的溫度、相對溼度及光線對於樟芝椴木培養的生長影響甚大。更發現椴木培養之菌絲體的菌絲厚度，在菌種型態上的轉化有極大的關鍵影響。

另一方面，此研究結果說明，椴木培養之菌絲體與子實體在三萜類化合物的產量上有明顯的變化。以不同生長時期的一次菌絲體和二次菌絲體於HPLC測定內含指標性三萜類化合物含量。此外，本實驗室椴木培養之樣品與市售商品於HPLC進行三萜類化合物含量比較。

Antrodia camphorata (Niu-Chang-Chih or Niu-Chan-Ku), Polyporaceae, is a medicinal mushroom that has been used for centuries in Taiwan for the prevention and treatment of various diseases including alcohol and drug intoxication, skin itching and, cancer. A. camphorata is grown on the hardwood of endemic species Cinnamomum kanehirai Hay (Lauraceae). A. camphorata is consisting of various bioactive compounds include terpenoids, benzenoids, lignans, benzoquinone derivatives, succinic and maleic derivatives, in addition to polysaccharides. In this study, we found that that the cultivation temperature, relative humidity and the light have significant effect on the growth of A. camphorata in the wood cultivation method. We also found that the wood cultivation period has noticeable effect on the thickness of the grown mycelium and its morphology.

On the other hand, our results also indicated that there is a significant variation in the yield of triterpenoids from the wood grown mycelium as well as fruiting bodies. We have quantitatively determined the major triterpenoids using HPLC in the wood cultivation grown primary and secondary mycelium of A. camphorata at different growth periods. Furthermore, the HPLC triterpenoids quantitative data from our wood cultivation grown A. camphorata were compared with commercial samples.

目錄
書名頁
博碩士論文授權書
論文口試委員審定書
中文摘要..................................................I
英文摘要.................................................II
致謝....................................................III
目錄......................................................V
表目錄...................................................IX
圖目錄....................................................X
附錄-圖目錄.............................................XII

第一章 前言...............................................1
第二章 文獻回顧...........................................2
2-1 牛樟樹的簡介.........................................2
2-2 牛樟芝的簡介.........................................3
2-3 名稱簡介.............................................4
2-4 牛樟芝的命名.........................................5
2-5 外觀型態.............................................6
2-6 樟芝的成份分析.......................................9
2-6-1 多醣體.............................................9
2-6-2 三萜類化合物......................................10
2-7 生長條件的影響......................................12
2-7-1 物理因素..........................................12
2-7-1-1 溫度............................................12
2-7-1-2 光照............................................12
2-7-1-3 濕度............................................13
2-7-1-4 通氣與創傷......................................13
2-7-2 化學因素..........................................13
2-7-2-1 碳源............................................13
2-7-2-2 氮源............................................14
2-7-2-3 碳氮比..........................................14
2-7-2-4 無機鹽類........................................14
2-7-2-5 生長因素........................................14
2-7-2-6 油脂、脂肪酸添加物..............................15
第三章 牛樟芝椴木培養....................................23
3-1 牛樟芝椴木培養......................................23
3-1-1 實驗材料與方法....................................23

3-1-1-1 菌株來源........................................23
3-1-1-2 實驗用藥品......................................24
3-1-1-3 儀器設備........................................24
3-1-2 實驗方法..........................................25
3-1-2-1 菌種保存........................................25
3-1-2-2 平面培養基製備與接菌活化........................26
3-1-3 牛樟芝椴木培養之生長型態........................28
3-1-4 牛樟芝椴木培養之空氣刺激........................31
3-1-4-1 以空氣刺激誘導子實體產生之結論...................32
3-1-4-2 牛樟芝椴木培養之空氣刺激影響結果討論............33
3-1-5 牛樟芝椴木培養之結果討論........................35
第四章 牛樟芝三萜類分析..................................37
4-1 實驗材料與方法......................................37
4-1-1 HPLC分析用溶劑....................................37
4-1-2 儀器設備..........................................37
4-1-3 HPLC分析條件......................................38
4-2 牛樟芝指標三萜類標準品及檢量線......................39
4-3 本實驗室樣品製備與命名..............................42
4-4 本實驗室各個階段培養之菌種三萜類分析................44

4-4-1 本實驗室之一次菌絲體樣品分析......................44
4-4-2 本實驗室之一次菌絲體樣品分析討論..................50
4-4-3 本實驗室之二次菌絲體樣品分析......................51
4-4-4 本實驗室之二次菌絲體樣品分析討論..................57
4-4-5 各個階段菌絲體之HPLC分析結果......................58
4-4-6 市售商品之樣品製備與命名..........................60
4-4-7 市售商品之HPLC分析................................64
第五章 結論與展望.......................................75
第六章 參考文獻.........................................77
附錄.....................................................82
附錄一﹑本實驗室自行純化標準品之HPLC圖譜及檢量線.........82
附錄二﹑本實驗室自行純化三萜類標準品之加成實驗...........88
附錄三﹑本實驗室ACX標準品之HPLC圖譜及加成實驗............95
作者簡歷............99

表目錄
表.3- 1 樟芝菌株編號與菌株來源...........................23
表.4- 1 各個階段牛樟芝菌絲體以Chloroform萃取之樣品命名...42
表.4- 2 一次菌絲體分析樣品中所含的指標三萜類含量(mg/mL)........................49
表.4- 3 一次菌絲體中所含的指標三萜類含量(mg/ g)............49
表.4- 4 二次菌絲體分析樣品中所含的指標三萜類含量(mg/ mL)............56
表.4- 5 二次菌絲體中所含的指標三萜類含量(mg/ g)............56
表.4- 6 市售商品之命名............60
表.4- 7 市售商品(固體)分析樣品中指標三萜類含量(mg/ mL)............73
表.4- 8 市售商品(固體)中指標三萜類含量(mg/ g)............73
表.4- 9 市售商品(液體)中指標三萜類含量(mg/ mL)............74

圖目錄
圖.2- 1 牛樟樹............3
圖.2- 2 牛樟芝............4
圖.2- 3 牛樟芝子實體之顯微構造圖............7
圖.2- 4 樟芝子實體原始新種發表中的擔孢子圖............8
圖.2- 5 抗腫瘤活性的β-(1,6)分支的β-1,3-D-葡聚醣結構............16
圖.2- 6 ß-(1→3)-D-葡聚醣結晶結構............17
圖.2- 7 從樟芝發現的三萜類化合物............18
圖.2- 8 從樟芝發現的三萜類化合物............19
圖.2- 9 從樟芝發現的三萜類化合物............20
圖.2- 10 從樟芝發現的三萜類化合物............21
圖.2- 11 從樟芝發現的三萜類化合物............22
圖.3-1 樟芝斜面培養24℃培養一個月後菌種保存情形............26
圖.3-2 樟芝菌種平面培養一個月生長情形............27
圖.3-3 樟芝椴木培養實驗流程............29
圖.3-4 牛樟芝菌種在各個階段之生長型態............30
圖.3-5 牛樟芝椴木培養之空氣刺激............31
圖.3-6 各個椴木經空氣刺激後的結果............34
圖.4- 1 AC1標準品(4 mg/ mL)之HPLC圖譜............40
圖.4- 2 AC1之HPLC檢量線圖............40
圖.4- 3 AC2標準品(4 mg/ mL)之HPLC圖譜............41
圖.4- 4 AC2之HPLC檢量線圖............41
圖.4- 5 本實驗室各個階段牛樟芝菌絲體萃取物資訊............43
圖.4- 6 12個月份一次菌絲體以Chloroform萃取之HPLC............45
圖.4- 7 14個月份一次菌絲體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............45
圖.4- 8 16個月份一次菌絲體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............46
圖.4- 9 18個月份一次菌絲體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............46
圖.4- 10 20個月份一次菌絲體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............47
圖.4- 11 22個月份一次菌絲體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............47
圖.4- 12 24個月份一次菌絲體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............48
圖.4- 13 6個月份二次菌絲體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............52
圖.4- 14 7個月份二次菌絲體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............52
圖.4- 15 8個月份二次菌絲體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............53
圖.4- 16 9個月份二次菌絲體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............53
圖.4- 17 10個月份二次菌絲體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............54
圖.4- 18 11個月份二次菌絲體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............54
圖.4- 19 12個月份二次菌絲體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............55
圖.4- 20 市售商品(固體)以Chloroformh萃取流程圖............61
圖.4- 21 市售商品(固體)以Hexane萃取流程............61
圖.4- 22 市售商品(液體)以Chloroformh萃取流程圖............62
圖.4- 23 市售商品之萃取物資訊............63
圖.4- 24 愛麗美以Chloroform萃取之HPLC圖譜............66
圖.4- 25 汎可士以Chloroform萃取之HPLC圖譜............66
圖.4- 26 金穎以Chloroform萃取之HPLC圖譜............67
圖.4- 27 金穎以Hexane萃取之HPLC圖譜............67
圖.4- 28 GB2子實體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............68
圖.4- 29 麗豐菌絲體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............68
圖.4- 30 麗豐發酵液以Chloroform萃取之HPLC圖譜............69
圖.4- 31 長庚生技以Chloroform萃取之HPLC圖譜............69
圖.4- 32 華齊堂以Chloroform萃取之HPLC圖譜............70
圖.4- 33 多年生子實體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............70
圖.4- 34 多年生子實體以Chloroform萃取之HPLC圖譜............71
圖.4- 35 朝科大口服液以Chloroform萃取之HPLC圖譜............71
圖.4- 36 優生牛樟芝粉末以Chloroform萃取之HPLC圖譜............72

附錄-圖目錄
圖. 1 AC3標準品(1 mg/ mL)之HPLC圖譜............83
圖. 2 AC3標準品之HPLC檢量線圖............83
圖. 3 AC5標準品(1 mg/ mL)之HPLC圖譜............84
圖. 4 AC5標準品之HPLC檢量線圖............84
圖. 5 AC6標準品(1 mg/ mL)之HPLC圖譜............85
圖. 6 AC6標準品之HPLC檢量線圖............85
圖. 7 AC7標準品(1 mg/ mL)之HPLC圖譜............86
圖. 8 AC7標準品之HPLC檢量線圖............86
圖. 9 AC8標準品(1 mg/ mL)之HPLC圖譜............87
圖. 10 AC8標準品之HPLC檢量線圖............87
圖. 11 LFA(50 mg/ mL)之HPLC圖譜............88
圖. 12 LFA與AC2加成實驗之HPLC圖譜............89
圖. 13 LFA與AC4加成實驗之HPLC圖譜............89
圖. 14 LFA與AC5加成實驗之HPLC圖譜............90
圖. 15 LFA與AC6加成實驗之HPLC圖譜............90
圖. 16 LFA與AC7加成實驗之HPLC圖譜............91
圖. 17 LFA與AC8加成實驗之HPLC圖譜............91
圖. 18 LFB(50 mg/ mL)之HPLC圖譜............92
圖. 19 LFB與AC2加成實驗之HPLC圖譜............92
圖. 20 LFB與AC5加成實驗之HPLC圖譜............93
圖. 21 LFB與AC7加成實驗之HPLC圖譜............93
圖. 22 LFB與AC8加成實驗之HPLC圖譜............94
圖. 23 ACX-A標準品之HPLC圖譜............95
圖. 24 ACX-B標準品之HPLC圖譜............95
圖. 25 GB2子實體與ACX(A)加成實驗之HPLC圖譜............96
圖. 26 天然子實體A與ACX(A)加成實驗之HPLC圖譜............96
圖. 27 天然子實體B與ACX(B)加成實驗之HPLC圖譜............97
圖. 28 LFA(Hexane)與ACX(B)加成實驗之HPLC圖譜............97
圖. 29 LFB(Hexane)與ACX(B)加成實驗之HPLC圖譜............98

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