臺灣博碩士論文加值系統

由近年來，由於化學合成清潔劑對生活環境中的破壞，不僅汙染了水源，而且還無形的產生致癌的機率，對於人體與自然環境中的影響也是日積月累的。而在化工肥皂還有沐浴商品還未開發前，無患子果實就是以前老一輩人做為清潔的天然洗潔劑。無患子本身含有皂苷素能產生泡沫且溶於水，無患子是一種天然的非離子型的界面活性劑，界面活性強，低濃度就可以發泡，進入水溝後能夠被發酵分解，是具有環保的天然洗潔劑。
本研究是建立一套新的 HPLC 分析方法來檢測無患子產品中無患子皂素群成分的穩定性，移動相為水：乙晴，其比例為 50：50，連接 ODS Hypersil 250×4.6 mm(5μm) 的層析管柱，偵測波長為 206 nm，流速為 1.0 mL/min，注射量為 10μL，此分析條件可在10分鐘內完成。
在分析確效方面，自備型純化無患子標準品其線性迴歸係數R2 為 0.9997；。代表精密度的相對標準偏差（RSD）介於0.04 %～1.26 %之間。代表準確度的回收率為99.35 %。
在無患子產品的試驗方面，加入少量的防腐劑及發泡劑的無患子萃取液，實驗觀測結果而在49～63天之後都會產生發霉與沉澱現象，而皂素群成份波峰面積的變化量增加。而改良後兩種無患子產品：無患子洗手乳與無患子洗廁劑，因為加入了具有抗菌與殺菌功能的香茅精油，使兩種產品在六個月期間無發現發霉現象，安定性相當理想。

In recent years, the chemically synthetical cleansers not only pollute the water resources, but also increase the probability of human carcinogenicity. Such destroying impacts to humans and environment have being accumulating. Before developed of these chemical soaps and industrial bathing detergents, Sapindus had being used as a natural cleanser for very long time. Sapindus contains abundant saponins, which are water-soluble and can produce foams. Sapindus is a non-ionic surfactant as well as strong interface activity and can be foamed with low concentration. It can be easily decomposed by fermenting after flowed into the gutter and is a natural green detergent.

In this research, a HPLC method was developed to determine the ingredients of saponins in Sapindus. The mobile phases were prepared with water and acetonitrile with the ratio of 50 to 50. Chromatographic methods were performed with a HPLC system equipped with ODS Hypersil 250×4.6 mm(5μm) column with UV/Vis absorption set at 206 nm, flow rate set at 1.0 mL/min and an injection of 10 μL as well as each runtime about ten minutes.

In the result of analytical method validation, the linear regression coefficient (R2) was 0.9997, the relative standard deviations(RSD) of precision experiments were between 0.04 %～1.26 %, and the recoveries of accuracy experiment were 99.35 %.

In the observation tests of Sapindus products by adding a small amount of preservative and foaming agent to Sapindus extract, the experimental products all became moldy and precipitated within 49 to 63 days and the peak area of saponin group ingredients increased in the period of the experiment. After plenty of tests, we developed two Sapindus products: Sapindus hand cleanser and Sapindus toilet spray detergent. After the adding of citronella oil with the antibiotic and disinfecting capacity, there was no mold found in these two products for six months with relatively good stability.

目錄
中文摘要............................................................................................I
Abstract .........................................................................................III
謝誌..................................................................................................V
目錄.................................................................................................VI
第壹章 緒論......................................................................................1
一、前言...........................................................................................1
二、研究目的...................................................................................2
三、文獻回顧...................................................................................3
1.無患子介紹...................................................................................3
2.無患子皂素...................................................................................4
3.無患子分析方法...........................................................................5
4.起泡劑介紹...................................................................................6
5.增稠劑介紹.................................................................................11
6.精油介紹.....................................................................................15
四、儀器分析原理........................................................................21
第貳章 實驗...................................................................................28
一、藥品和試劑............................................................................28
二、儀器設備................................................................................29
三、溶液配置................................................................................30
1.不同有機溶液比例的比較.........................................................32
2.自備萃取液標準品的純化與鑑定.............................................33
3.安定性發生變化萃取液標準品的純化與鑑定.........................34
4.基質輔助雷射脫附游離飛行時間質譜儀（MALDI-TOF MS）設定................................................................................................35
五、分析方法的確效....................................................................36
1.系統適用性（System Suitability）........................................36
2.線性及範圍（Linearity & Range）........................................36
3.精密度（Precision）................................................................36
4.準確度（Accuracy）................................................................37
5.偵測極限與定量極限( LOD & LOQ )......................................37
六、無患子洗手乳與洗廁劑的製作和改良................................38
1.觀測每日pH值變化量與目標皂素群面積變化........................38
2.觀測加入發泡劑 3％的ESB-70（SLES）目標皂素群面積變化....................................................................................................38
3.觀測3％ESB-70（SLES）加入防腐劑（MP & PP）目標皂素群面積變化....................................................................................39
4.觀測3％ ESB-70（SLES）加入1％食鹽的目標皂素群面積變化………………..................................................................................39
5.無患子洗手乳與洗廁劑的製作與觀測安定性.........................39
第參章、結果與討論....................................................................42
一、方法與條件之建立................................................................42
1.不同有機溶液比例的比較.........................................................42
2.自備萃取液標準品的純化與鑑定.............................................44
3.安定性發生變化萃取液標準品的純化與鑑定.........................49
二、分析方法的確效....................................................................53
1.系統適用性（System Suitability）........................................53
2.線性及範圍（Linearity & Range）........................................54
3.精密度（Precision）................................................................55
4.準確度（Accuracy）................................................................58
5.偵測極限與定量極限( LOD & LOQ )......................................58
三、產品的觀測與安定性............................................................60
1.觀測每日pH值變化量與面積變化...........................................60
2.觀測加入發泡劑 3％的ESB-70（SLES）面積變化................62
3.觀測3％ ESB-70（SLES）加入防腐劑（MP & PP）面積變化....................................................................................................63
4.觀測3％ ESB-70（SLES）加入食鹽面積變化........................64
5.無患子洗手乳與洗廁劑的製作與觀測安定性.........................65
第肆章、結論................................................................................67
第伍章、參考文獻........................................................................70
表目錄
表 一、不同尺寸應用需求之管柱尺寸.......................................25
表 二、正相層析與逆相層析之特性比較...................................26
表 三、MALDI-TOF MS 操作參數設定.....................................35
表 四、無患子洗手乳製作表.......................................................41
表 五、無患子洗廁劑製作表.......................................................41
表 六、系統適用性結果數據100 ppm（六重複注射標準品溶液）................................................................................................53
表 七、三重複注射結果（for Linearity & Range）................54
表 八、無患子純化自備標準品經HPLC分析之重複性數據.....56
表 九、無患子純化自備標準品經HPLC分析之重複性數據.....57
表 十、無患子純化自備標準品的回收率數據...........................58
表 十一、無患子純化自備標準品經 HPLC 之數據...................59
表 十二、HPLC 對無患子純化自備標準品的偵測極限和定量極限....................................................................................................59
表 十三、無患子粗萃取液在室溫下pH變化值與面積變化......60
表 十四、無患子粗萃取液在冷藏4℃下pH變化值與面積變化....................................................................................................60
表 十五、無患子粗萃取液加入發泡劑在室溫與一般冷藏4℃的面積變化 62
表 十六、無患子粗萃取液加入防腐劑在室溫與一般冷藏4℃的面積變化........................................................................................63
表 十七、無患子粗萃取液加入食鹽在室溫與一般冷藏4℃的面積變化............................................................................................64
表 十八、無患子產品在室溫與冷藏4℃的面積變化.................65
圖目錄
圖 一、無患子果實剖面圖、阮巽雯，「無患子果實組成分與其製備卸妝乳液之研究」， 國立嘉義大學....................................3
圖 二、無患子主要三種化學骨幹；引用黃慧琪博士等人，皂素的生物活性與化學成分之探討，中國醫藥大學..........................5
圖 三、液相層析法的應用...........................................................22
圖 四、高效能液相層析儀示意圖...............................................27
圖 五、高效能液相層析儀裝置...................................................27
圖 六、無患子層析圖；引用林信諾，碩士論文，無患子皂素定量及膜分離技術之探討，國立台灣大學....................................32
圖 七、無患子在移動相乙腈：水（40：60）在0~1分鐘，乙腈：水（60：40）在1~30分鐘，注射量為10μl，流速為1.0 mL/min，檢測波長為 206 nm...................................................42
圖 八、無患子在移動相乙腈：水（40：60）在0~1分鐘，乙腈：水（60：40）在1~30分鐘，注射量為10μl，流速為1.0 mL/min，檢測波長為 206 nm...................................................43
圖 九、無患子在分析型管柱，移動相為乙腈:水（50：50），注射量為10μl，流速為1.0 mL/min，檢測波長為 206 nm....43
圖 十、自備萃取液標準品在半製備型管柱，移動相為乙腈:水（50：50），注射量為50μl，流速為1.0 mL/min，檢測波長為 206 nm.....................................................................................45
圖 十一、自備萃取液標準品在分析型管柱，移動相為乙腈:水（50：50），注射量為10μl，流速為1.0 mL/min，檢測波長為 206 nm.....................................................................................46
圖 十二、自備萃取液標準品在分析型管柱，移動相為乙腈:水（40：60）在0~1分鐘，乙腈：水（60：40）在1~30分鐘，注射量為10μl，流速為1.0 mL/min，檢測波長為 206 nm....46
圖 十三、α-CHCA基質溶液的MALDI-TOF質譜圖.................47
圖 十四、2,5-DHB基質溶液的MALDI-TOF質譜圖.................47
圖 十五、自備萃取液純化標準品在α-CHCA基質溶液的MALDI-TOF質譜圖......................................................................48
圖 十六、自備萃取液純化標準品在2,5-DHB基質溶液的MALDI-TOF質譜圖......................................................................48
圖 十七、發生變化萃取液無患子標準品在分析型管柱，移動相為乙腈:水（50：50），注射量為10μl，流速為1.0 mL/min，檢測波長為 206 nm.....................................................................51
圖 十八、發生變化萃取液無患子標準品無患子在分析型管柱，移動相為乙腈:水（40：60）在0~1分鐘，乙腈:水（60：40）在1~30分鐘，注射量為10μl，流速為1.0 mL/min，檢測波長為 206 nm....................................................................................51
圖 十九、發生變化萃取液品無患子純化標準品在α-CHCA基質溶液的MALDI-TOF質譜圖..........................................................52
圖 二十、發生變化萃取液品無患子純化標準品在2,5-DHB基質溶液的MALDI-TOF質譜圖..........................................................52
圖 二十一、無患子純化自備標準品之檢量線圖.......................55
圖 二十二、無患子粗萃取液在室溫與冷藏4℃的pH變化值....61
圖 二十三、無患子粗萃取液在室溫與冷藏4℃的面積變化.....61
圖 二十四、無患子洗手乳在室溫環境下，6個月含量變化曲線圖....................................................................................................66
圖 二十五、無患子洗廁劑在室溫環境下，6個月含量變化曲線圖....................................................................................................66

1.Chen, C. H. Flora of Taiwan, editorial committee of the flora of Taiwan, second edition, Taiwan, 1993, pp. 599.。

2.阮巽雯，「無患子果實組成分與其製備卸妝乳液之研究」，碩士論文，國立嘉義大學。

3.Huang, H. C.; Tsai, W. J.; Morris-Natschke, S. L.; Tokuda,H.; Lee, K. H.; Wu, Y. C.; Kuo, Y. H. J. Nat. Prod. 2006,69, 763.

4.黃慧琪博士等人，皂素的生物活性與化學成分之探討，中國醫藥大學。

5.徐慶琳，山藥粉之特性及產品開發之研究，碩士論文，國立嘉義大學。

6.Chen, R. K., Principle of LC-MS-MS and its Application in Food Analysis Food Industries, Taiwan R.O.C, Vol. 33, No. 3, pp.44~54(2001).

7.盧正權，｢儀器總覽-化學分析儀器｣，第 103 頁。

8.Douglas A. Skoog, F. James Holler, Timothy A.Nieman, “Principlesof Instrumental Analysis”6th Edition, pp.762~783,816~831.

9.W. G. Fu., “The Application of HPLC on Food Analysis” FoodIndustries Vol. 32, Taiwan R. O. C, pp.39~53 (2000).

10.Sandie Lindsay,“High Performance Liquid Chromatography” 2nd edition,London: Wiley ( 1992 ).

11.林信諾，無患子皂素定量及膜分離技術之探討，碩士論文，國立台灣大學(2006)。

12.莊琇婷，Acarbose 分析方法的開發與分析方法確校，碩士論文，朝陽科技大學應用化學研究所，台中 (2007)。

13.黃致遠，無患子化學成分分離與分析方法開發，碩士論文，國立嘉義大學生物醫藥科學研究所 (2009)。

14.W. G. Fu., “The Application of HPLC on Food Analysis” Food Industries Vol. 32, Taiwan R. O. C, pp.39~53 (2000).

15.張慧華，六種香茅揮發性成分分析研究，碩士論文，國立屏東科技大學熱帶農業暨國際合作系，屏東（2006）。

16.H. D. Hua., “The Main Points of Choose HPLC Column” Agilent Technologies, Taiwan R. O. C, No.3, (2000).

17.C. J. Argoudelis., “Isocratic Liquid Chromatograph Method for Aspartame and Other Additives in Soft Drinks” Journal of Chromatography A, No. 303, pp.256~262 (1984).