臺灣博碩士論文加值系統

牛樟芝(Taiwanofungus camphorates)是台灣特有的一種藥用真菌，只生長在牛樟樹幹腐朽之心材內壁，其子實體生長非常緩慢且稀少，且受限於牛樟樹為稀有保育物種以及椴木取得不易獲得，在培養方面仍以固態培養和液態培養為主。本研究主要目的為，以松杉靈芝為基質進行樟芝子實體固態發酵培養，並且添加不同的中草藥水淬液於培養基中刺激牛樟芝生長。實驗結果發現經MEA添加松杉靈芝細末所培養之牛樟芝菌絲馴化後之樟芝菌種可以較快適應以松杉靈芝為基質的營養環境。經不同處理的松杉靈芝於培養樟芝三個半月後以冷水浸漬組比熱水處理組所形成的子實體原基點 (FBP: fruit-body primordial)較多，且三萜類含量可高出10%。從觀察菌落得知，添加小血藤、明日葉和含羞草水萃液可促進樟芝菌絲生長速率及增進色澤顯紅且分別刺激特殊三萜類增加達12.16%、 230.7%和10%的含量。松杉靈芝培養樟芝菌絲約於三個月左右，與野生樟芝菌絲具有相同構造之子實體原基點，此結構是發展成子實體前的一個重要的過程。隨著時間FBP的分布面積逐漸增加，且有堆疊、擴張以及擴大的現象產生。而後FBP型態發展趨近類菌孔之構造，更近乎於野生樟芝子實體之菌孔狀結構生成。從以松杉靈芝為基質培養樟芝之HPLC分析圖譜發現，其波峰訊號兼具樟芝子實體與松杉靈芝兩者的特徵，並且在培養四個半月內樟芝特殊的三萜類增量達114.86%。由TLC圖譜分析顯示亦同時具有兩者的泳帶，因此可以確定以松杉靈芝為基質能成功培養出樟芝子實體。

Taiwanofungus camphorates (also known as Niu-Chang Chih) is an unique fungi species only found in Taiwan, and is known an important medicinal mushroom in native populations. The fruitbody of T. camphorates is rare and expensive because it only parasites inside the hollow trunk of Cinnamonum kanehirae and is not easy to cultivate. This plant has been become less and less due to illegal cut to search Niu-Chang Chih for medical use in past decades, so it’s more and more difficult to find T. camphorates’s fruitbodies. At present, the most part of artificial cultivation methods are solid-state fermentation and submerge culture to get mycelium biomass but it does not contain triterpenoids that general recognized contributing to the medical efficacy. The main purpose of this study was to evaluate the cultivation of T. camphorates by using the fruitbody of Ganoderma tsugae as main substrate source in a solid state culture, and add various herbs’ extract to see which was the best to enhance the growth of mycelium.
Primary result showed that Taiwanofungus camphorates could be domesticated by adding the fine powder of Ganoderma tsugae fruitbody into MEA medium and found it easily adapted to the substrate of Ganoderma tsugae fruitbody without other nutrition sources. By using Ganoderma tsugae fruitbody to cultivate T. camphorates, the results also showed Taiwanofungus camphorates mycelia surface tended to produce the fruit-body primordial (FBP) after three months cultivation. FBP is one of the most critical phases in the mushroom fruitbody generating process. Following the cultivation time increased, the distribution area of FBP expanded and accreted gradually, it’s similar to the structure of wild fruit bodies found.The result of HPLC profiles showed the content of triterpenoid in T.camphorates that grown in Ganoderma tsugae soaked in the cold water was 10% higher than which treated in 85°C hot water. In the case of herb’s extracts effect, Mucuna macrocarpa, Angelica Keiskei Koidz and Mimosa pudica could increase the triterpenoid content in T. camphorates by 12.16%、230.7% and 10% respectively. The result of HPLC profiles also indicated that characteristic peaks of T. camphorates cultivated from Ganoderma tsugae fruitbody had both original special peaks of T. camphorates and G. tsugae.
Moreover, the content of triterpenoid increased 114.86% after four and a half month cultivation. The result of TLC profile also showed it had both the bands of G. tsugae fruitbody and T. camphorate fruitbody. Hence, we ensured it had successful to cultivate Taiwanofungus camphorates fruitbody by using G. tsugae as main substrate through solid culture.

摘要-------------------------------------------------------------------------------- I
Abstract--------------------------------------------------------------------------- III
目錄-------------------------------------------------------------------------------- V
圖目錄-------------------------------------------------------------------------- VIII
表目錄---------------------------------------------------------------------------- XI
第一章 緒論---------------------------------------------------------------------- 1
第一節 文獻整理----------------------------------------------------------- 1
1.1牛樟芝簡介--------------------------------------------------------- 1
1.1.1牛樟芝的分類與分布------------------------------------- 1
1.1.2牛樟芝生理活性功能------------------------------------- 3
1.2牛樟芝成分分析與結構------------------------------------------ 7
1.2.1多醣體 (polysaccharides)--------------------------------- 7
1.2.2三萜類化合物 (triterpenoids)---------------------------- 8
1.2.3菌絲體與子實體成分結構比較------------------------ 14
1.3松杉靈芝簡介---------------------------------------------------- 19
1.4中草藥簡介------------------------------------------------------ 24
1.4.1小血藤------------------------------------------------------ 24
1.4.2明日葉----------------------------------------------------- 24
1.4.3含羞草----------------------------------------------------- 24
1.4.4咸豐草------------------------------------------------------ 26
1.4.5消渴草------------------------------------------------------ 27
1.4.6千里光------------------------------------------------------ 27
1.4.7仙草--------------------------------------------------------- 28
1.4.8牛奶埔------------------------------------------------------ 29
1.4.9五葉刺五加------------------------------------------------ 30
第二節 實驗目的--------------------------------------------------------- 31
第二章 實驗架構--------------------------------------------------------------- 33
第三章 研究材料與方法------------------------------------------------------ 35
3.1 材料與設備----------------------------------------------------------- 35
3.1.1菌株-------------------------------------------------------------- 35
3.1.2實驗材料-------------------------------------------------------- 35
3.1.3儀器與設備----------------------------------------------------- 36
3.2 研究方法-------------------------------------------------------------- 39
3.2.1 以MEA培養樟芝菌絲之實驗---------------------------- 39
3.2.1.1 MEA培養樟芝--------------------------------------- 39
3.2.1.2 MEA培養基添加松杉靈芝粉末培養樟芝------ 39
3.2.1.3 MEA培養基添加中草藥萃液培養樟芝--------- 39
3.2.2 以松杉靈芝為基質培養樟芝菌絲之實驗-------------- 40
3.2.2.1 松杉靈芝浸漬溫度改變培養樟芝---------------- 40
3.2.2.2松杉靈芝表面積改變培養樟芝---------------------- 41
3.2.3松杉靈芝添加中草藥萃液培養樟芝之實驗-------------- 42
3.3 分析方法-------------------------------------------------------------- 43
3.3.1菌絲萃取方法-------------------------------------------------- 43
3.3.2 HPLC分析方法------------------------------------------------ 43
3.3.2.1分析條件------------------------------------------------- 43
3.3.2.2 HPLC圖譜積分面積算法---------------------------- 44
3.3.3 TLC分析方法-------------------------------------------------- 44
第四章 結果與討論----------------------------------------------------------- 45
4.1 以MEA培養樟芝菌絲之探討------------------------------------- 45
4.1.1 MEA添加不同濃度松杉靈芝粉末培養樟芝之影響---- 45
4.1.2 MEA培養基添加不同中草藥萃液培養樟芝之影響---- 47
4.2 以松杉靈芝培養為基質樟芝菌絲之探討----------------------- 57
4.2.1松杉靈芝浸漬溫度改變培養樟芝之影響----------------- 57
4.2.2松杉靈芝表面積改變對培養樟芝之影響----------------- 61
4.3 以松杉靈芝為基質添加中草藥萃液培養樟芝之影響-------- 63
第五章 討論與結論---------------------------------------------------------- 67
5.1 以松杉靈芝為基質培養樟芝之結構探討----------------------- 67
5.2 以松杉靈芝為基質培養樟芝之成分變化探討----------------- 73
5.3 以松杉靈芝為基質培養樟芝之化合物鑑定-------------------- 79
5.4 結論與未來展望----------------------------------------------------- 85
5.5 未來展望-------------------------------------------------------------- 87
參考文獻------------------------------------------------------------------------- 89
附錄----------------------------------------------------------------------------- 101

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